基本克隆實(shí)驗(yàn)流程：取得更高效率的三個(gè)步驟

1.確定入門(mén)克隆

入門(mén)克隆 是您進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的方式和地點(diǎn)，因?yàn)樗愕哪康幕蚧?attL 序列插入的 DNA 片段，然后將其與 attR 序列重組以創(chuàng)建所需的表達(dá)克隆。選擇一種我們的TOPO 克隆載體來(lái)構(gòu)建您的入門(mén)克隆，或從經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的 Ultimate ORF 克隆庫(kù)中購(gòu)買(mǎi)預(yù)制克隆。

2.用克隆酶介導(dǎo)反應(yīng)

一旦準(zhǔn)備好入門(mén)克隆，就可以將目標(biāo)基因輕松地導(dǎo)入第二個(gè)質(zhì)粒，即目標(biāo)載體。該反應(yīng)由 LR Clonase 酶混合物介導(dǎo)，利用蛋白機(jī)制從入門(mén)克隆中切除目的基因，整合至目標(biāo)載體中，然后用作您的表達(dá)克隆。其逆反應(yīng)很簡(jiǎn)單：利用 BP Clonase 酶混合物進(jìn)行 BP 反應(yīng)（attB 和 atPP 位點(diǎn)之間的重組）。LR Clonase和 BP Clonase 酶混合物均采用易于使用的預(yù)混液形式，確保了反應(yīng)之間的一致性和可靠性。

3.選擇目標(biāo)載體

將目的基因或 DNA 片段克隆到 Gateway 載體后，您可以根據(jù)需要將其導(dǎo)入多個(gè)目標(biāo)載體中。

從大腸桿菌、酵母、昆蟲(chóng)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的蛋白表達(dá)到 RNAi 研究，從晶體學(xué)到蛋白與蛋白互作的功能研究，總有一種目標(biāo)載體適合您的應(yīng)用。對(duì)于需要特殊或定制載體的應(yīng)用領(lǐng)域，Gateway 載體轉(zhuǎn)換系統(tǒng)可以將任何載體轉(zhuǎn)換為與 Gateway 克隆兼容的載體。

GeneCopoeia提供的 EZShuttle™重組克隆體系應(yīng)用E.coli和λ噬菌體特異位點(diǎn)的重組酶促體系使 DNA丨片段在載體間相互轉(zhuǎn)換，其原理與 Gateway克隆技術(shù)相同。

BP反應(yīng)-構(gòu)建入門(mén)載體：

通過(guò)PCR將attB位點(diǎn)添加到目的DAN序列兩側(cè)，形成attB-PCR產(chǎn)物。用attB-PCR產(chǎn)物或者含attB位點(diǎn)的供體質(zhì)粒和含attP位點(diǎn)的質(zhì)粒發(fā)生重組生成入門(mén)克隆。

LR反應(yīng)-構(gòu)建表達(dá)載體：

制作表達(dá)載體時(shí)，選擇適合的目標(biāo)載體非常重要。這種選擇取決于許多因素，如宿主類(lèi)型，所需的表達(dá)水平和實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹＿x定的attR表達(dá)載體與attL-入門(mén)載體重組以產(chǎn)生表達(dá)載體。

艾美捷科技與國(guó)內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商優(yōu)保持著密切的合作關(guān)系，目前已成為眾多知名品牌的中國(guó)總代理或一級(jí)代理，主要包括：AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等，可以在短時(shí)間內(nèi)為用戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的前沿資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。 

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