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大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù)：22發(fā)布時間：2016/4/6 15:53:32
更新日期：2016/4/6 15:53:32
所 在 地：中國大陸
產(chǎn)品型號：
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優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
標(biāo)本的采集及保存
1. 組織勻漿: 將動物的組織標(biāo)本先用PBS洗滌,去除多余血液,勻漿化后放在20mlPBS中于-20° C放置過夜,第二天,經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜,將勻漿物5000x g離心5分鐘,取上清即可檢測。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月，-80℃不應(yīng)超過2個月；標(biāo)本溶血會影響*后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測；高血脂的標(biāo)本不需進(jìn)行特殊處理，可直接檢測。
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒
操作步驟
實(shí)驗開始前，請?zhí)崆芭渲坪盟性噭�；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，均應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。建議各實(shí)驗室在操作前行預(yù)實(shí)驗以建立*佳稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔�？瞻卓准訕悠废♂屢�100ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗結(jié)果有效性，每次實(shí)驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測。
