QuantiTect SYBR Green PCR Kit在寬泛的范圍內(nèi)符合線性規(guī)律,可實現(xiàn)特異性定量檢測(參見Specific quantification over a wide linear range)。與其他聚合酶相比,HotStarTaq DNA Polymerase具有嚴格的熱啟動,進一步提高了PCR反應(yīng)的特異性。獨特的PCR緩沖液和HotStarTaq DNA Polymerase,確保低豐度轉(zhuǎn)錄本的定量檢測,低至5個拷貝的目標序列也可被準確檢測(參見Highly specific amplification)。QuantiTect SYBR Green PCR Kit與QuantiTect Reverse Transcription Kit和QuantiTect Primer Assays配合使用,可獲得靈敏、可靠的結(jié)果(參見Specific and sensitive quantification)。
QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit中經(jīng)特別優(yōu)化的UNG溶液配合經(jīng)驗證的PCR預(yù)混液可有效避免PCR產(chǎn)物中的殘留污染,并對靶序列進行可靠的定量檢測(參見High specificity in real-time PCR)。
原理
QuantiTect SYBR Green PCR Kit含有優(yōu)化的即用型預(yù)混液,可使用SYBR Green I對cDNA靶序列進行高特異性和靈敏度的real-time定量分析。預(yù)混液中的熒光染料SYBR Green I可對很多不同的靶序列進行分析,無需合成靶標特異性標記引物。獨特的PCR緩沖液含有K+和NH4+,能促使特異性引物退火,獲得高PCR特異性和靈敏度(參見Specific primer annealing)。此外,HotStarTaq DNA Polymerase具有嚴格的熱啟動,可防止非特異性產(chǎn)物的形成。
QuantiTect SYBR Green PCR預(yù)混液含有dUTP,可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 (UNG)預(yù)處理,保證之前反應(yīng)殘留的PCR產(chǎn)物會影響后續(xù)的PCR反應(yīng)。