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VEB-3型與VEB-1型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶生化特性
點(diǎn)擊次數(shù)：1013 發(fā)布時(shí)間：2007/1/26 15:23:16
目的 研究VEB-3型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的生化特性，并與VEB-1型ESBL進(jìn)行比較。方法 將blaVEB-3和blaVEB-1基因連接至pET28a載體上，并用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21進(jìn)行克隆表達(dá)，分別挑選blaVEB-3或blaVEB-1陽(yáng)性表達(dá)的菌落測(cè)定β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素對(duì)其抑菌濃度（MIC），同時(shí)提取酶蛋白進(jìn)行等電點(diǎn)和酶動(dòng)力學(xué)分析。 結(jié)果 VEB-3和VEB-1型ESBL具有基本一致MIC和相同的等電點(diǎn)（pI 7.45），但兩者的酶動(dòng)力學(xué)性質(zhì)存在一定的差異：對(duì)頭孢他啶和頭孢噻肟，VEB-3較VEB-1表現(xiàn)出更高的親和力，兩者Km相差一倍左右；對(duì)頭孢噻吩，VEB-1比VEB-3更具親和力；而對(duì)阿莫西林，VEB-1型ESBL表現(xiàn)出很高的親和力，而VEB-3僅有低的親和力，兩者Km相差20多倍。 結(jié)論 VEB-3和VEB-1型ESBL具有相同的等電點(diǎn)，不同的動(dòng)力學(xué)參數(shù)，blaVEB-1基因中Leu56 →Phe突變可能導(dǎo)致了兩者酶動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的差異
原創(chuàng)作者：上海光譜儀器有限公司
