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動物組織樣本的前處理
一般采用pH 7.4, 0.01mol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA-2Na, 0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化鈉溶液或直接用0.86%的生理鹽水作為勻漿介質(zhì)。
二、組織勻漿的制備
1、取組織塊(0.1g~0.2g)*少可到2~5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放入5ml的勻漿管中。
2、按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(pH7.4, 0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的氯化鈉溶液)或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
3、勻漿的方式有多種:手工勻漿,機(jī)器勻漿,超聲粉碎。
① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,制成10%的勻漿液。
② 機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成10%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,連續(xù)3~5次,在冰水中進(jìn)行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
③ 超聲粉碎:用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。
鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時間。
4、將制備好的10%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進(jìn)行測定.
三、樣本保存:
動物組織樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如不反復(fù)凍融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。
制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測定,如放置時間過長相關(guān)酶活會有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測定可存5~7天等)
*新產(chǎn)品:
黑老虎根標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
貓爪草標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
千金子素L3標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
朱砂根對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
相思子堿對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
CAS:18181-80-1,溴螨酯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
抗眼鏡蛇毒原血漿標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
克拉維酸標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
聯(lián)苯芐醇對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
CAS:521-61-9,大黃素甲醚標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
明黨參對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
青風(fēng)藤堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:4090-18-0對照品 |
輪環(huán)藤根對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
纖維蛋白原對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
間氨基酚對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
鹽酸吡哆辛(VB6)對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
CAS:7440-52-0,鉺標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
CAS:121-79-9,沒食子酸丙酯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
辣蓼標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
4-差向四環(huán)素對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
2-NP-AOZ標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:19687-73-1 |
氟草胺標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:1861-40-1 |
呋喃唑酮對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
維格列汀對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
丙酸交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
槐花對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
噠螨靈標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:96489-71-3 |
花生紅衣標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
CAS:74222-97-2,甲嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
鹽酸尼卡地平對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
帕米膦酸二鈉對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
紫菀酮對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
積雪草苷對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
羊蹄素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:3785-24-8對照品 |
芭蕉根標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
橙皮對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
甲氨蝶呤對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |
(Bi,Se,Sn,Te,As,P,Sb,Fe,Ni,Pb,S,Zn)多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(混標(biāo))標(biāo)準(zhǔn)品/對照品價格 |
EPA有機(jī)揮發(fā)物VOC-Mix21標(biāo)準(zhǔn)品|對照品 |
維生素A醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品/對照品 |
滅菌唑標(biāo)準(zhǔn)品|對照品,cas:131983-72-7 |
三苯雙脒對照品/標(biāo)準(zhǔn)品 |