產(chǎn)品展示
ABI LightShift化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒20148
點(diǎn)擊次數(shù)：85發(fā)布時(shí)間：2016/9/23 10:08:13
更新日期：2023/10/7 10:43:14
所 在 地：中國大陸
產(chǎn)品型號：
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
描述
Thermo Scientific LightShift化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒是一種非常強(qiáng)勁且靈敏的檢測系統(tǒng)，通過進(jìn)行電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合相互作用。這個(gè)試劑盒包括用于建立和定制DNA結(jié)合反應(yīng)的試劑，用于驗(yàn)證體系的一組對照DNA和蛋白提取物，作為探針去識別生物素標(biāo)記靶DNA的穩(wěn)定鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物，以及非常靈敏的用于檢測的化學(xué)發(fā)光底物。LightShift 化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒的特點(diǎn)：
• 檢測胞核抽提物中低豐度蛋白的理想選擇
• 靈敏度超越放射性和地高辛檢測法
• 兼容之前建立的常規(guī)DNA-蛋白互作結(jié)合條件
• 包括EBNA對照系統(tǒng)，幫助新用戶建立一個(gè)適當(dāng)?shù)臋z測體系，了解用于確定相互作用特異性的方法
LightShift EMSA檢測的原理與蛋白免疫印跡類似。生物素末端標(biāo)記的雙鏈DNA與細(xì)胞核提取物或純化的因子共同孵育，之后進(jìn)行非變性凝膠電泳。然后將DNA快速（30分鐘）轉(zhuǎn)印至帶正電的尼龍膜上，進(jìn)行紫外交聯(lián)，然后使用HRP標(biāo)記的鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物檢測，再與底物孵育。從標(biāo)記到獲得結(jié)果的整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程可以在一天內(nèi)完成。
蛋白與DNA之間的相互作用對于DNA復(fù)制、重組和修復(fù)、轉(zhuǎn)錄和病毒組裝等許多細(xì)胞進(jìn)程具有關(guān)鍵調(diào)控作用。電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)是研究基因調(diào)控和確定蛋白:DNA之間相互作用的核心技術(shù)。
EMSA技術(shù)基于一個(gè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：即在非變性聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠電泳過程中，蛋白:DNA復(fù)合物的遷移速度比自由的DNA分子更慢。由于蛋白結(jié)合使DNA的遷移速率發(fā)生了偏移或延遲，這個(gè)方法也被稱為凝膠遷移或凝膠阻滯分析。在EMSA技術(shù)出現(xiàn)之前，蛋白:DNA之間相互作用主要是通過硝化纖維素膜過濾實(shí)驗(yàn)分析。
整個(gè)實(shí)驗(yàn)中需要實(shí)驗(yàn)者準(zhǔn)備的是已純化的末端生物素標(biāo)記的目標(biāo)DNA，待檢測的蛋白提取物，尼龍膜和基本電泳設(shè)備。目標(biāo)DNA可在合成的同時(shí)進(jìn)行5＇或3＇端生物素標(biāo)記，或在合成之后使用Thermo Scientific生物素3＇末端DNA標(biāo)記試劑盒（產(chǎn)品貨號89818）進(jìn)行標(biāo)記。用戶可通過不同方法獲得胞核、胞質(zhì)或全細(xì)胞蛋白提取物，包括Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（產(chǎn)品貨號78833）。
內(nèi)容及儲(chǔ)存
Sufficient For: 100 binding reactions ａnd detection on 800 cm2of membrane (10 mini-gel blots)
• 10X Binding Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Biotin-EBNA Control DNA, 50 µL (store at -20°C)
• Unlabled EBNA DNA, 50 µL (store at -20°C)
• EBNA Extract, 125 µL (store at -20°C)
• Poly(dl·dC), 125 µL (store at -20°C)
• 50% Glycerol, 500 µL (store at -20°C)
• 1% NP-40, 500 µL (store at -20°C)
• 1 M KCl, 1 mL (store at -20°C)
• 100mM MgCl2, 500 µL (store at -20°C)
• 200mM EDTA, pH 8.0, 500 µL (store at -20°C)
• 5X Loading Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Stabilized Streptavidin-HRP, 1.5 mL (store at 4°C)
• Luminol/Enhancer Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Stable Peroxidase Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Blocking Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• 4X Wash Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• Substrate Equilibration Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• 10X Binding Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Biotin-EBNA Control DNA, 50 µL (store at -20°C)
• Unlabled EBNA DNA, 50 µL (store at -20°C)
• EBNA Extract, 125 µL (store at -20°C)
• Poly(dl·dC), 125 µL (store at -20°C)
• 50% Glycerol, 500 µL (store at -20°C)
• 1% NP-40, 500 µL (store at -20°C)
• 1 M KCl, 1 mL (store at -20°C)
• 100mM MgCl2, 500 µL (store at -20°C)
• 200mM EDTA, pH 8.0, 500 µL (store at -20°C)
• 5X Loading Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Stabilized Streptavidin-HRP, 1.5 mL (store at 4°C)
• Luminol/Enhancer Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Stable Peroxidase Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Blocking Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• 4X Wash Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• Substrate Equilibration Buffer, 500 mL (store at 4°C)
