抗體捕捉ELISA

本法主要用于檢測(cè)IgM抗體。由于IgM抗體出現(xiàn)于感染早期，所以檢測(cè)出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷�？贵w捕捉ELISA根據(jù)所用標(biāo)記方式不同可分為標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗體、標(biāo)記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標(biāo)記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序?yàn)椋?/p>

① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢血清 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干

③ 加酶標(biāo)抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

斑點(diǎn)ELISA

與常規(guī)的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡(jiǎn)便、節(jié)省抗原等優(yōu)點(diǎn)，而且結(jié)果可長(zhǎng)期保存；但其也有不足，主要是在結(jié)果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序?yàn)椋?/p>

⑴載體膜的預(yù)處理及抗原包被　取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進(jìn)行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測(cè)抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使硝酸纖維素膜干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點(diǎn)加40－53個(gè)樣品，每個(gè)壓圈可加抗原液1－20μl。

⑵ 封閉　將硝酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動(dòng)物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。

⑶ 加被檢血清　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應(yīng)一定時(shí)間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。

⑷ 加酶標(biāo)抗體，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，用洗滌液洗三次。

⑸顯色　加入新鮮配制的底物液，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。

⑹ 結(jié)果判定　以陽性、陰險(xiǎn)血清作為對(duì)照，膜片中央出現(xiàn)深棕紅色斑點(diǎn)者為陽性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。

布ELISA

（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是學(xué)者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型檢測(cè)技術(shù)。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為反應(yīng)提供較大的表面積，提高反應(yīng)的敏感性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優(yōu)點(diǎn)。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對(duì)布氏桿菌抗原的檢測(cè)為例，C－ELISA的主要程序?yàn)椋?/p>

⑴ 把抗布氏桿菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并經(jīng)洗滌及封閉；

⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次；

⑶ 加酶標(biāo)記的抗布氏桿菌抗體，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次；

⑷ 加入底物液顯色；

⑸ 測(cè)定OD值。

雞CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒 

影響因素編輯 播報(bào)

酶聯(lián)(ELISA)是如檢驗(yàn)科常用的學(xué)檢測(cè)方法，其操作簡(jiǎn)單，無須特殊設(shè)備，使其在各醫(yī)院都有應(yīng)用。但是，如果忽視了影響其結(jié)果的因素，難免會(huì)造成假陰性或假陽性，因此，了解影響實(shí)驗(yàn)的因素，減少差錯(cuò)事故的發(fā)生是其必要的。

素質(zhì)因素

實(shí)驗(yàn)室人員的素質(zhì)主要包括五個(gè)方面：思想素質(zhì)、文化素質(zhì)、技術(shù)素質(zhì)、心理素質(zhì)、身體素質(zhì)。應(yīng)具備一個(gè)良好的思想素質(zhì)，因?yàn)槲覀兊姆⻊?wù)對(duì)象是人，我們的道德水平直接關(guān)系到人們的健康和生命安危，如果馬馬虎虎。三心二意，難免會(huì)有差錯(cuò)事故發(fā)生，我們應(yīng)該熱愛，耐心細(xì)致。在工作中如標(biāo)本混淆、張冠李戴、報(bào)告單發(fā)錯(cuò)等都有可能造成嚴(yán)重后果；其次文化素質(zhì)和技術(shù)素質(zhì)，我們要熟練掌握本的基本理論和基本技術(shù)，認(rèn)真學(xué)習(xí)新理論新知識(shí)，努力提高自己的業(yè)務(wù)水平，創(chuàng)造一個(gè)能夠勝任本職工作的技術(shù)平臺(tái)。良好的心理素質(zhì)就是要勇于面對(duì)工作生活中的挫折，在繁忙工作中，有條不紊，冷靜沉著的處理有關(guān)事務(wù)。人員素質(zhì)問題是影響檢驗(yàn)結(jié)果的要因素。

標(biāo)本處理因素

實(shí)驗(yàn)室人員收到標(biāo)本后應(yīng)認(rèn)真查對(duì)，對(duì)不符合要求的標(biāo)本和申請(qǐng)單要拘收，合格標(biāo)本要及時(shí)分離血清，避免溶血，提取血清時(shí)不應(yīng)混有大量纖維蛋白或細(xì)胞成分。對(duì)不能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始記錄，標(biāo)本管上好標(biāo)上待檢者姓名、日期。從冰箱取出的標(biāo)本要預(yù)溫至室溫，對(duì)冰凍的樣品要融化好，并充分混勻再用。

注意事項(xiàng)編輯 播報(bào)

1、操作應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18 C～25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。

2、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。

3、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孔內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問污染，導(dǎo)致假陰性或假陽性。

4、要加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯(cuò)誤。

5、顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過多，以免顯色過強(qiáng)。

6、試劑的影響因數(shù)：應(yīng)選用有國家批準(zhǔn)文號(hào)，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品，不能圖便宜，忽視質(zhì)量。試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，在使用時(shí)先平衡至室溫，不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內(nèi)用完，剩余的試劑下次用時(shí)應(yīng)先檢查是否變質(zhì)，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。過期的試劑不宜再用，若別無選擇，應(yīng)做好雙份質(zhì)控品的監(jiān)測(cè)，確保結(jié)果的可靠性。

二、ELISA的類型ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：①固相的抗原或抗體，即“吸附劑”（immunosorbent） ;②酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為“結(jié)合物（conjugate）;③酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。