兔膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5) ELISA 試劑盒 

試劑盒組成

1. 酶標(biāo)板：用于包被抗原和加入酶標(biāo)抗體；

2. 酶標(biāo)抗體：與待測血清中的、、、、結(jié)合；

3. 抗原：用于包被酶標(biāo)板，與待測血清中的、、、、結(jié)合；

4. 陰性對照血清：用于設(shè)置陰性和陽性對照；

5. 陽性對照血清：用于設(shè)置陰性和陽性對照；

6. 洗滌液：用于清洗酶標(biāo)板；

7. 底物：用于顯色反應(yīng)；

8. 終止液：用于終止顯色反應(yīng)。

操作步驟

1. 準(zhǔn)備工作

（1）將試劑盒從冰箱中取出，放置至室溫；

（2）準(zhǔn)備所需的試劑和樣品；

（3）將酶標(biāo)板用洗滌液清洗干凈。

2. 包被抗原

（1）將抗原按照說明書要求稀釋后，加入酶標(biāo)板孔中，每孔100μL；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使抗原充分覆蓋酶標(biāo)板孔底部；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，4℃孵育過夜。

3. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

4. 加樣和孵育

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入100μL待測血清；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使血清充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時。

5. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

6. 加酶標(biāo)抗體

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入100μL酶標(biāo)抗體；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使酶標(biāo)抗體充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育1小時。

7. 洗滌和干燥

（1）取出酶標(biāo)板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標(biāo)板表面的水分。

8. 加底物顯色

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入100μL底物溶液；

（2）將酶標(biāo)板輕輕搖晃，使底物溶液充分覆蓋抗原；

（3）將酶標(biāo)板放入濕盒中，37℃孵育15-30分鐘。

9. 終止反應(yīng)并測量吸光度值

（1）在每個酶標(biāo)板孔中加入50μL終止液；

（2）立即用酶標(biāo)儀測量各孔的吸光度值。

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

兔膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5) ELISA 試劑盒

實驗注意事項

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒，確保試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

2. 嚴(yán)格控制實驗條件：實驗過程中要嚴(yán)格控制溫度、pH值、離子強度等條件，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3. 避免交叉污染：實驗過程中要避免交叉污染，確保每個步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。

4. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：實驗操作要標(biāo)準(zhǔn)化，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作，避免人為誤差對實驗結(jié)果的影響。

5. 定期校準(zhǔn)：定期對實驗儀器進行校準(zhǔn)，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實驗數(shù)據(jù)：實驗過程中要保存好實驗數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。

試劑盒性能：

1. 檢測范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 靈敏度：低檢測濃度小于0.78 nmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

合作單位:

中國醫(yī)科大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、北京大學(xué)、貴陽醫(yī)學(xué)院、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)

天津疾控中心、江南大學(xué)、山東大學(xué)、青島大學(xué)、香港大學(xué)

云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院

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