兔Rho家族GTP酶1(RND1) ELISA 試劑盒

一、實驗原理

 ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

二、實驗材料

1. 兔Rho家族GTP酶1(RND1) ELISA試劑盒
2. 酶標(biāo)板、酶標(biāo)板封口膜、封口機(jī)
3. 洗滌液、終止液
4. 人血清、血漿或組織勻漿樣本
5. 標(biāo)準(zhǔn)品
6. 實驗器具：吸管、酶標(biāo)儀、移液器等
 

三、操作步驟

1. 準(zhǔn)備工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復(fù)至室溫。同時準(zhǔn)備好實驗所需的材料和器具。
2. 加樣：在酶標(biāo)板的孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL，然后在后續(xù)的孔中依次加入待測樣本50μL。
3. 溫育：將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
5. 加酶：在每個孔中加入酶標(biāo)物100μL。
6. 溫育：再次將酶標(biāo)板密封，在37℃下溫育30分鐘。
7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標(biāo)板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
8. 加底物：在每個孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。
9. 終止反應(yīng)：在每個孔中加入終止液50μL。
10. 檢測：用酶標(biāo)儀在450nm波長下讀取各孔的吸光度（OD值）。

四、結(jié)果分析

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計算出樣本中兔Rho家族GTP酶1(RND1) 的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說明書或相關(guān)文獻(xiàn)。

五、注意事項

1. 在操作過程中，應(yīng)保持酶標(biāo)板的干燥，避免水分進(jìn)入孔內(nèi)。
2. 加樣時需確保加樣準(zhǔn)確、無氣泡產(chǎn)生。
3. 溫育和洗滌過程中需嚴(yán)格控制時間和溫度，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 在使用酶標(biāo)儀讀取OD值時，需確保波長設(shè)置正確，避免誤差產(chǎn)生。
5. 在整個實驗過程中，需保持操作環(huán)境的清潔和整潔，避免交叉污染。
 

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