人組織蛋白酶V(CTSV)酶聯(lián)免疫試劑盒下面說(shuō)下ELISA實(shí)驗(yàn)常遇到的問(wèn)題以及解決方案。
異常
結(jié)果描述
【白板】
顯色步驟結(jié)束后,酶標(biāo)板所有孔均無(wú)顏色。陽(yáng)性對(duì)照不顯色。
原因分析
1.試劑已過(guò)效期,或不同試劑盒組分混用
2.錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B
3.洗板及加樣過(guò)程中,酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力
4.終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液配置
5.蒸餾水有問(wèn)題
對(duì)策
1.檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)未過(guò)期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用
2.嚴(yán)格按說(shuō)明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現(xiàn)象
3.確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈
4.每次配制時(shí)都應(yīng)看清標(biāo)簽標(biāo)明物質(zhì)
5.確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未污染,與好蒸餾水比較
人組織蛋白酶V(CTSV)酶聯(lián)免疫試劑盒
顯色弱、靈敏度 低
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,包括陽(yáng)性對(duì)照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。
1.試劑盒超過(guò)期, 超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào); 試劑盒沒(méi)有按規(guī)定進(jìn)行保存,受高溫影響
2.試劑、樣品用未平衡至室溫
3.加入試劑的體積和時(shí)間有誤, 移 液器計(jì)量不準(zhǔn),吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔
4.洗板及加樣過(guò)程中,酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力
5.孵育時(shí)間及孵育溫度未達(dá)到要求 ,反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調(diào)整
6.洗板次數(shù)過(guò)多,或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求;洗滌沖擊力太大。浸泡時(shí)間太長(zhǎng)
7.顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入
8.底物作用時(shí)間不夠
9.蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題
人組織蛋白酶V(CTSV)酶聯(lián)免疫試劑盒
對(duì)策:
1.實(shí)驗(yàn)檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)試劑未過(guò)期。 不要將試劑盒長(zhǎng)時(shí)間置于常溫下,按使用規(guī)定儲(chǔ)藏。
2.從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡 20分鐘左右。
3.確定所使用的試劑體積正確,加入時(shí)間適當(dāng)。 校正移液器,移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快,排放應(yīng)完全
4.確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈,確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染
5.孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃,孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。 保溫期內(nèi)不宜多開門,以免影響保溫
6.嚴(yán)格按說(shuō)明書要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說(shuō)明書要求置留洗滌液時(shí)間和洗滌次數(shù)
7.顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過(guò)快,先加顯色劑?A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入
8.準(zhǔn)確定時(shí)
9.測(cè)定蒸餾水配制試劑對(duì)酶免疫法的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后陰陽(yáng)性對(duì)照正常,質(zhì)控正常,但臨床標(biāo)本感覺(jué)顯色較弱
1.待測(cè)標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的
2.標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑
對(duì)策
1.如有懷疑,可復(fù)檢
2.酶免實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑
人組織蛋白酶V(CTSV)酶聯(lián)免疫試劑盒
陰陽(yáng)性對(duì)照正常,但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽(yáng)性標(biāo)本未能檢出
1.未達(dá)要求的孵育溫度及孵育時(shí)間 可檢出強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本,但 質(zhì)控或弱陽(yáng)性標(biāo)本受 溫度變化影響較大而被未檢出
2.質(zhì)控品或標(biāo)本高溫放置過(guò)久,或被反復(fù)凍融致待測(cè)物滴度下降,而未能檢出
3.儀器設(shè)定不正確,濾光片不匹配
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