ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：

（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；

（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱(chēng)為"結(jié)合物"（conjugate）；

（3）酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。用于臨床檢驗(yàn)

的ELISA主要

豬白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 有以下幾種類(lèi)型：

 

       　雙抗體夾心法測(cè)抗原

          雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原常用的方法，操作步驟如下：

1） 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

2） 加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3） 加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的

酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。

4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中，此法適用于檢驗(yàn)各種

蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和

制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來(lái)源為抗血清，包被和酶標(biāo)用的抗體好分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克隆抗體，

一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，

而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng)，作一步檢測(cè)。

　　
          在一步法測(cè)定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成"夾心復(fù)合

物"。類(lèi)同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象，此時(shí)反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過(guò)剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（位于抗體過(guò)剩帶

上）某一抗原濃度的吸光值相同（參見(jiàn)1.3.2，圖1-4），如按常法測(cè)讀，所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量，這種現(xiàn)象被稱(chēng)為鉤狀效

應(yīng)（hook effect），因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使

用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時(shí)，應(yīng)注意可測(cè)范圍的高值。用

高親和力的單克隆抗體制備此類(lèi)試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。

　　
豬白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 

      假使在被測(cè)分子的不同位點(diǎn)上含有多個(gè)相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對(duì)此決定的同一單抗分別包被固

相和制備酶結(jié)合物。但在HBsAg的檢測(cè)中應(yīng)注意亞型問(wèn)題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(gè)亞型，雖然每種亞型均有相同

的a決定簇的反應(yīng)性，這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問(wèn)題。

　　
     雙抗體夾心法測(cè)抗原的另一注意點(diǎn)是類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動(dòng)物IgG的Fc

段結(jié)合。用作雙抗體夾心法檢測(cè)的血清標(biāo)本中如含有RF，它可充當(dāng)抗原成份，同時(shí)與固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合，表現(xiàn)出假陽(yáng)

性反應(yīng)。采用F（ab＇）或Fab片段作酶結(jié)合物的試劑，由于去除了Fc段，從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受

RF的影響，已被列為這類(lèi)試劑的一項(xiàng)考核指標(biāo)。