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ELISA試劑盒實驗步驟
點擊次數(shù)：133 發(fā)布時間：2023/11/8
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）是一種基于抗原-抗體反應的免疫學檢測方法，通過酶與抗體或抗原的結合，將抗原-抗體反應的特異性、敏感性和可重復性提高。ELISA試劑盒通常包含包被有特異性抗體的微型板、酶標記的特異性抗體、酶底物等。
二、實驗步驟
1. 酶標板設置
將ELISA試劑盒中的酶標板放置在實驗臺上，將不用的孔用封口膜封住，防止污染。根據(jù)實驗設計，將特異性抗體包被在酶標板上，設立陰性對照、陽性對照等。
2. 加樣
根據(jù)實驗設計，用移液器將樣品和標準品加入相應的孔中，加入樣品時應避免產(chǎn)生氣泡。加樣時應緩慢而謹慎，避免在孔壁上產(chǎn)生泡沫。每個樣品或標準品應設復孔，每個孔加入樣品或標準品的體積應相同。
3. 孵育
將酶標板在37℃下孵育一定時間，使抗原-抗體充分結合。孵育時間根據(jù)試劑盒說明書而定，一般約為1小時至數(shù)小時不等。孵育時應保證酶標板垂直放置，以免液體溢出。
4. 洗滌
將酶標板輕輕搖動，使未結合的抗原-抗體結合物從孔中沖洗掉。洗滌時應保證每個孔中的液體完全流出，避免殘留。洗滌次數(shù)根據(jù)試劑盒說明書而定，一般為2-3次。
5. 加酶標物
根據(jù)試劑盒說明書，將酶標記的特異性抗體加入相應的孔中，加入時應緩慢而謹慎，避免在孔壁上產(chǎn)生泡沫。每個孔加入的酶標物體積應相同。
6. 孵育
將酶標板在37℃下孵育一定時間，使酶標記的特異性抗體與抗原充分結合。孵育時間根據(jù)試劑盒說明書而定，一般約為30分鐘至1小時不等。孵育時應保證酶標板垂直放置，以免液體溢出。
7. 洗滌
將酶標板輕輕搖動，使未結合的酶標記特異性抗體從孔中沖洗掉。洗滌時應保證每個孔中的液體完全流出，避免殘留。洗滌次數(shù)根據(jù)試劑盒說明書而定，一般為2-3次
。
8. 加底物
根據(jù)試劑盒說明書，將底物溶液加入相應的孔中，加入時應緩慢而謹慎，避免在孔壁上產(chǎn)生泡沫。每個孔加入的底物體積應相同
。
9. 終止反應
在適當時間后，根據(jù)試劑盒說明書加入終止液，使反應停止。終止液的加入量應按照說明書要求進行。
10. 檢測
用酶標儀檢測各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)并進行分析。通常采用450nm波長進行檢測，但具體波長根據(jù)試劑盒說明書而定。
