大鼠γ分泌酶(γ-Secretase)ELISA試劑盒

概述:

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附檢測）是一種平板檢測技術(shù)，旨在檢測和定量肽、蛋白質(zhì)、抗體和激素等物質(zhì)。其他名稱，比如酶 免疫測定（EIA）也用于描述該的技術(shù)。在 ELISA 中，抗原必須固定化到固體表面，然后與連接到酶的抗體混合。通過 與適當?shù)牡孜锓跤瑴y量報告基因酶的活性來產(chǎn)生可測量的產(chǎn)物，從而實現(xiàn)檢測。該檢測策略中的關(guān)鍵元素是高度特 異性的抗體-抗原相互作用。

ELISA試劑盒的特點有：

一、高效、靈敏、特異的抗體

二、節(jié)省實驗經(jīng)費

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型

五、穩(wěn)定的重復性和可靠性

ELISA 試劑盒主要保證規(guī)格概述

檢測內(nèi)精度

檢測內(nèi)驗證顯示檢測板內(nèi)孔間的重現(xiàn)性。檢測內(nèi)驗證產(chǎn)生的數(shù)據(jù)有助于確保在板的不同孔中檢測的樣品給出可比較結(jié)果。以下是為具有代表性的板內(nèi)驗證實驗生成和報告的數(shù)據(jù)示例。在本示例中， 通過在同一檢測中檢測三個樣品各重復 14 次來評估 Invitrogen VCAM-1 人 ELISA 試劑盒。每個樣品的 %CV 表明該檢測具有良好的重現(xiàn)性。具有已知 Hu sVCAM-1 濃度的樣品重復檢測14 次，以確定檢測的精度。

檢測間精度

檢測間精度顯示不同日期進行的檢測間重現(xiàn)性。檢測間精度通常為< 10%。這確保獲得的結(jié)果隨著時間的推移和試劑盒之間保持一致。以下是為檢測間精度生成和報告的典型數(shù)據(jù)示例。在該示例中， 使用 Invitrogen 淀粉樣蛋白 β 42 人 ELISA 試劑盒在多天內(nèi)檢測三份樣品，共檢測 36 次。結(jié)果顯示變異系數(shù)小于 10%，從而證明了檢測間良好再現(xiàn)性。

稀釋線性度

線性是相對于基于標準曲線的分析物計算量來定義。樣品中分析物的終計算濃度應與檢測定量范圍內(nèi)的任何稀釋濃度相同。開發(fā)完善的免疫檢測試劑盒可大限度地減少不同樣品基質(zhì)和其他可能干擾的因素的潛在影響。稀釋線性驗證實驗提供了關(guān)于在不同稀釋水平下測試的樣品結(jié)果精度的信息。對每種經(jīng)驗證樣品類型進行稀釋線性測試，如果結(jié)果是每種稀釋預期濃度的 70%-130%，則視為良好。線性對于在測定的動態(tài)范圍內(nèi)準確測量分析物濃度非常重要，可使用公式計算：

% 線性度 = (稀釋后測量濃度 / 預期濃度) x 100

特定樣品類型的稀釋線性度通常如下表所示。在該示例中， 使用 HeLa 細胞裂解物評價 Invitrogen c-Myc (總) 人 ELISA 試劑盒。在檢測的動態(tài)范圍內(nèi)，用試劑盒隨附的標準稀釋緩沖液稀釋 HeLa 細胞裂解物。測量值與預期值顯示出良好的檢測線性，并且沒有來自樣品基質(zhì)的明顯干擾。

HeLa 細胞在 37°C 下，含有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 中生長，并用 細胞提取緩沖液裂解，并進行超聲處理。將該裂解物在標準稀釋緩沖液中稀釋至檢測范圍，并測量 c-Myc（總量）。檢測結(jié)果與預期濃度的線性回歸檢測產(chǎn)生的相關(guān)系數(shù)為0.99。

ELISA 平行性

平行性提供了在給定 ELISA 中以相同方式檢測天然和重組樣品的確認。平行性驗證產(chǎn)生的數(shù)據(jù)確保給定分析物在天然樣品中以類似于標準曲線的劑量依賴性方式被識別。 

圖 1 顯示了 ELISA 試劑盒驗證期間針對并行性生成的數(shù)據(jù)。在檢測的動態(tài)范圍內(nèi)連續(xù)稀釋重組標準品、大鼠血清和大鼠血漿，并使用我們的大鼠生長激素 ELISA 試劑盒結(jié)果表明，稀釋緩沖液中的標準品可用于準確定量測試基質(zhì)中的樣品濃度。

圖 1.大鼠生長激素 ELISA 平行性
隨機大鼠血清和血漿樣品在標準稀釋緩沖液中連續(xù)稀釋。將每種稀釋液的光密度與大鼠生長激素標準曲線作圖。該標準品準確反映了天然樣品中大鼠生長激素的含量。

ELISA 回收率

回收率用于確定分析物檢測是否受樣品基質(zhì)差異的影響。基質(zhì)（如血清和血漿）可能具有干擾因素，影響 ELISA 準確定量分析物的能力。

通過將已知量的分析物加標到不同樣品基質(zhì)中來驗證回收率。進行檢測并確定回收率。通常，如果平均回收率為 80%-120%，則認為樣品基質(zhì)對檢測準確定量分析物的能力影響小。 

右表是用于報告回收率的典型格式。在該示例中，   檢測了 Invitrogen 脂聯(lián)素人 ELISA 試劑盒在 5 份不同血漿樣品中的回收率。 

ELISA 靈敏度

靈敏度定義為可與背景區(qū)分的低分析物水平。這通常稱為分析靈敏度或檢測限。通過將零標準重復獲得的平均 O.D. 加上 2 個標準偏差來確定靈敏度。

例如， Invitrogen Tau (磷酸化) [pT181] 人 ELISA KI 靈敏度 <為 10 pg/mL。這表明測試的每個試劑盒批次的靈敏度均低于 10pg/mL。用于報告 ELISA 測定靈敏度的典型規(guī)格是 " 人 Tau [pT181] <的低檢測濃度為 10 pg/mL。這通過零標準檢測 64 次時獲得的平均 O.D. 加上兩個標準偏差來確定。

ELISA 特異性

進行特異性測試以驗證檢測到的目標分析物與其他密切相關(guān)的分子未發(fā)生交叉反應。交叉反應可能導致假陽性結(jié)果或不準確定量。為了確保僅識別所需的分析物，對一組其他物質(zhì)進行交叉反應性測試。

例如， 通過篩選 20 種不同物質(zhì)的交叉反應性，對 Invitrogen IL-6 小鼠 ELISA 試劑盒的特異性進行了檢測。用于報告 ELISA 特異性結(jié)果的典型格式是 " 使用 IL-6 小鼠 ELISA 試劑盒檢測了一組 10 ， 000 pg/mL 的物質(zhì)的緩沖溶液。 1β γ 檢測后發(fā)現(xiàn)無交叉反應性：小鼠 IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-10 ， IFN- β ， TNF- α ；大鼠 1β IL-1 β ， IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IFN- γ ， TNF- α ；人 IL-2 ， IL-4 ， IL-6 ， IL-10 ， IL-12 ， IFN- γ ， TNF- α ；豬 IL-8

ELISA 質(zhì)量控制

ELISA 的生產(chǎn)過程涉及高質(zhì)量生產(chǎn)標準，以確保高質(zhì)量 ELISA 試劑盒的一致生產(chǎn)�；疽蛩匕�—嚴格的文檔和記錄保存，人員培訓，質(zhì)量控制程序，設施和設備維護，關(guān)鍵流程的驗證，原材料控制，可追溯性，環(huán)境監(jiān)測，變更控制， 和符合監(jiān)管標準。 

ELISA 移液和洗滌技術(shù)技巧

移液技巧

1. 使用符合制造商建議范圍內(nèi)的正確移液器

2. 確認吸頭已牢固地插與移液器上

3. 確認移液時沒有氣泡

4. 在每個標準品，樣品或試劑之間更換吸頭

5. 每種試劑使用不同的儲液槽

6. 將樣品吸取到孔的側(cè)面，避免飛濺

7. 始終進行樣品 / 標準品復孔設置

洗滌流程

1. 通過將吸頭輕輕地降低到每個孔底部，完全吸液所有孔中的液體。
    備注：小心操作，不要劃傷孔內(nèi)側(cè)。

2. 用至少 400 μ L µL 的洗滌緩沖液填充孔

3. 浸泡 15 到 30

4. 從孔中吸出洗滌緩沖液

5. 按照提示重復方案 (通常 3-4 次)

6. 清洗完成后，翻轉(zhuǎn)孔板并在吸水組織上輕敲 (必要時用力) 干燥。確保清除所有殘留的液體。

7. 或者，也可使用洗瓶或自動洗板機。請務必 遵循上述內(nèi)容。

實驗步驟

1. 使用將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。

2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果，每次實驗請使用新的標準品溶液。

3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

注意事項劑盒的儲存

1. 未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

須知：

試劑盒內(nèi)酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在驗后1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標簽為準，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。

公司與各大高校、醫(yī)院及權(quán)威科研單位保持著良好的合作關(guān)系，公司的產(chǎn)品質(zhì)量及服務態(tài)度得到了他們的一致認可。篤瑪生物本著客戶至上的原則為客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，公司產(chǎn)品有任何質(zhì)量的問題免費包退換（非人為因素造成的）。公司提供免費代測服務，并且收到樣本七個工作日出結(jié)果，確保數(shù)據(jù)的準確性

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原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司