一、 實驗原理

是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人胰島素受體α(INSRA)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并 洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰島素受體α(INSRA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

二、抗體捕捉ELISA
本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現(xiàn)于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據(jù)所用標(biāo)記方式不同可分為標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗體、標(biāo)記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標(biāo)記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序為：
① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干
② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干
③ 加酶標(biāo)抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干
④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液
⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。
斑點ELISA
與常規(guī)的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節(jié)省抗原等優(yōu)點，而且結(jié)果可長期保存；但其也有不足，主要是在結(jié)果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為：
⑴載體膜的預(yù)處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進(jìn)行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使硝酸纖維素膜 干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。
⑵ 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。
⑶ 加被檢血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應(yīng)一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。
⑷ 加酶標(biāo)抗體，37℃反應(yīng)一定時間后，用洗滌液洗三次。
⑸顯色 加入新鮮配制的底物液，37℃反應(yīng)一定時間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。
⑹ 結(jié)果判定 以陽性、陰險血清作為對照，膜片中央出現(xiàn)深棕紅色斑點者為陽性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。

三、90分鐘一步法ELISA試劑盒：
1.高效，靈敏，特異的抗體
2.穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性
3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高和固相載體
4.適用血清，血漿，組織勻漿液，細(xì)胞培養(yǎng)上清液，尿液等多種標(biāo)本型

四、ELISA試劑盒組成

五、注意事項

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

六、操作步驟

七、代測，有什么具體要求？
樣本要處理過的，寄來的樣本附檢驗要求 （一定要附檢驗要求 ）
樣本寄來要記得保存好，一定要放置冷凍冰袋

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司