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技術(shù)文章
High Pure 組織RNA提取試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù):24 發(fā)布時(shí)間:2024/8/7 17:24:57
一般描述
高純核糖核酸組織試劑盒是為從組織樣品中純化完整的、不含任何污染性的脫氧核糖核酸的總核糖核酸而設(shè)計(jì)的。低至中等產(chǎn)量的核糖核酸分離。在離液鹽(鹽酸胍)存在下,核酸可與玻璃羊毛狀物的表面結(jié)合。這使得高純過(guò)濾管能夠特異性地固定核酸(DNA和RNA),同時(shí)不含污染物。對(duì)于RNA分離,結(jié)合條件可以優(yōu)化,以確保所有RNA的固定化。高純度RNA分離試劑盒可以從廣泛的研究樣本材料中快速分離完整的總RNA,包括培養(yǎng)細(xì)胞、哺乳動(dòng)物血液、白細(xì)胞(WBC)、酵母和細(xì)菌。它能迅速?gòu)牟溉閯?dòng)物組織中分離出總RNA,如老鼠的肝臟、脾臟、肺和心臟。
容量:高純旋轉(zhuǎn)過(guò)濾管可容納700 μL樣本量。
樣品材料:固體組織(如小鼠肝、脾、肺、心臟):1 - 25 mg。
注:樣品大小取決于制備組織的方法;較大樣品(>10 mg)應(yīng)通過(guò)轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)化處理。

容量:高純旋轉(zhuǎn)過(guò)濾管可容納700 μL樣本量。
樣品材料:固體組織(如小鼠肝、脾、肺、心臟):1 - 25 mg。
注:樣品大小取決于制備組織的方法;較大樣品(>10 mg)應(yīng)通過(guò)轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)化處理。
應(yīng)用
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
- 在大約30分鐘內(nèi)制備核糖核酸樣品。
- 獲得適合下游應(yīng)用的濃縮核糖核酸。
- 用一個(gè)試劑盒除去污染物小化核糖核酸的損失,不需要沉淀或其他降解核糖核酸的處理步驟。
- 無(wú)需危險(xiǎn)有機(jī)化合物的使用如氯化銫、苯酚、溴化乙錠。
組分
- 裂解/結(jié)合緩沖液
- 脫氧核糖核酸酶ⅰ,凍干
- 脫氧核糖核酸酶孵育緩沖液
- 洗滌緩沖液I
- 洗滌緩沖液II
- 洗脫緩沖液
- 高純紡絲過(guò)濾管(含玻璃纖維絨)
- 收集管
質(zhì)量
- 組織在裂解/結(jié)合緩沖液中破碎和均質(zhì)化,并如所述進(jìn)行純化。
- 核糖核酸產(chǎn)量是通過(guò)測(cè)量260納米的光密度來(lái)確定的。
- 完整性和大小分布通過(guò)變性瓊脂糖凝膠中核糖體核糖核酸的條帶模式來(lái)檢測(cè)。
- 以逆轉(zhuǎn)錄酶MuLV和15為引物,在鏈合成中使用10 & # 956;L的核糖核酸洗脫液。在隨后的聚合酶鏈反應(yīng)中,使用擴(kuò)增高保真聚合酶鏈反應(yīng)系統(tǒng)和甘油醛3-磷酸脫氫酶(GAPDH)的特異性引物,獲得了預(yù)期的983 bp的擴(kuò)增產(chǎn)物。
- 通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè),而沒(méi)有預(yù)先的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),結(jié)果為不存在污染性的脫氧核糖核酸;沒(méi)有獲得擴(kuò)增產(chǎn)物。
制備說(shuō)明
在失活RNases的離液鹽(鹽酸胍)存在下,組織樣本被破壞和均勻化。然后將勻漿加載到高純旋轉(zhuǎn)過(guò)濾管中的玻璃纖維羊毛狀物上。在該方法使用的緩沖條件下,所有核酸均與高純管中的玻璃纖維羊毛狀物結(jié)合,而污染物(鹽、蛋白質(zhì)和其他污染物)則不會(huì)結(jié)合。制劑中的DNA被DNase I直接在過(guò)濾器上消化。簡(jiǎn)單的洗滌和旋轉(zhuǎn)步驟就能很容易地去除被消化的段和其他細(xì)胞污染物。剩余的純化RNA在少量的低鹽緩沖液中洗脫。
其他說(shuō)明
高純技術(shù)和二氧化硅吸附試劑盒
僅用于生命科學(xué)研究。不用于診斷操作。
僅用于生命科學(xué)研究。不用于診斷操作。
圖1:不同均質(zhì)化程序的比較。使用各種程序均質(zhì)化小鼠肝臟。用高純核糖核酸組織試劑盒從每種勻漿中純化總核糖核酸。分離的核糖核酸的等分試樣用特異性針對(duì)谷氨酸脫羧酶基因區(qū)域的引物進(jìn)行反向轉(zhuǎn)錄。通過(guò)凝膠電泳分析cDNA產(chǎn)物。
泳道1:均質(zhì)化:Ultra Turrax;產(chǎn)量:1.9 & # 956;g/mg組織;A 260/ A 280 : 2.0
泳道2:均質(zhì)化:電動(dòng)一次性塑料杵;產(chǎn)量:3 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道3:均質(zhì)化:研缽和杵,20 G針頭;產(chǎn)量:1.5 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道4:均質(zhì)化:手動(dòng)一次性塑料杵,20 G針頭;產(chǎn)量:1.8 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道5:均質(zhì)化:手動(dòng)一次性塑料杵;產(chǎn)量:3.4 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道6:均質(zhì)化:小珠渦旋;產(chǎn)量:3 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道7:分子量標(biāo)記
泳道1:均質(zhì)化:Ultra Turrax;產(chǎn)量:1.9 & # 956;g/mg組織;A 260/ A 280 : 2.0
泳道2:均質(zhì)化:電動(dòng)一次性塑料杵;產(chǎn)量:3 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道3:均質(zhì)化:研缽和杵,20 G針頭;產(chǎn)量:1.5 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道4:均質(zhì)化:手動(dòng)一次性塑料杵,20 G針頭;產(chǎn)量:1.8 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道5:均質(zhì)化:手動(dòng)一次性塑料杵;產(chǎn)量:3.4 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道6:均質(zhì)化:小珠渦旋;產(chǎn)量:3 & # 956;g/mg組織;A 260 /A 280 : 2.0
泳道7:分子量標(biāo)記
原創(chuàng)作者:上海篤瑪生物科技有限公司