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膠原酶A

點(diǎn)擊次數(shù)：33 發(fā)布時(shí)間：2024/7/30 14:01:08
  

一般描述

膠原酶是一種蛋白酶，可切割三螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白，即膠原蛋白。[1]溶組織梭菌 產(chǎn)生六種類型的膠原酶，即α、β、γ、δ、ε和λ。這些膠原酶對(duì)結(jié)締組織具有活性，并且對(duì)明膠的反應(yīng)性高于膠原。[2]來(lái)自溶組織梭菌（ Clostridium histolyticum ）的膠原酶具有非常強(qiáng)的活性，它在低至4-10°C的溫度下可從兩端消化膠原蛋白。[3]

特異性

膠原酶可降解天然膠原蛋白。梭菌蛋白酶，一種胰蛋白酶樣酶，以及中性蛋白酶也會(huì)降解其他蛋白質(zhì)。
酶活性：
膠原酶活性：>0.15U/mg（根據(jù)Wünsch）（+ 25℃，4-苯基-偶氮芐-氧羰基-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg作為底物）
污染酶活性：胰蛋白酶、梭菌蛋白酶和中性蛋白水解酶活性
膠原酶A具有平衡的酶活性比例。

應(yīng)用

來(lái)自 溶組織梭菌 的膠原酶被廣泛應(yīng)用于：
  • 分解許多類型的組織（如，肺，心臟，肌肉，骨骼，脂肪組織，肝臟，腎臟，軟骨，乳腺，胎盤，血管，腦，腫瘤，臍帶）
  • 制備但細(xì)胞懸浮液用于建立原代細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。[4]當(dāng)產(chǎn)量、活力和功能性很重要時(shí)，推薦使用膠原酶A。[5][6]制備來(lái)自多種組織的細(xì)胞，如肝細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、胰島細(xì)胞、上皮細(xì)胞、肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞 等。但是，應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定各批次的酶是否適用于特定組織的解離。[7][8]

單位定義

內(nèi)容物
凍干粉，非無(wú)菌
單位定義：來(lái)自Roche的膠原酶以Wünsch單位表示（在+25°C 下，每分鐘使用Wünsch底物生成1 μmol產(chǎn)物）。
通常，膠原酶活性以Mandl單位表示（在+37°C下，在5小時(shí)內(nèi)從膠原中釋放1 μmol亮氨酸）。
遺憾的是，兩種活性單位之間沒(méi)有一致的換算因數(shù)，因?yàn)镸andl單位部分取決于膠原酶制劑中污染蛋白酶的濃度，而這是一個(gè)不確定變量。實(shí)際上，高純度膠原酶制劑的Mandl單位比酶活要低于粗制膠原酶制劑。梭菌 制劑的換算因數(shù)通常約為1:1800（例如 ，批次的 梭菌 膠原酶含有約0.15 Wünsch U/mg和250 Mandl U/mg）。

制備說(shuō)明

激活劑：Ca2+
抑制劑：
膠原酶抑制劑：EDTA，EGTA，Cys，His，DTT，
血清不抑制膠原酶。
梭菌蛋白酶抑制劑：TLCK
胰蛋白酶抑制劑：抑肽酶、胰蛋白酶抑制劑（蛋清、大豆）、血清
工作濃度：0.5至2.5 mg/ml
儲(chǔ)存條件（工作溶液）：-15至-25 °C
羅氏建議僅重新配立即使用所需的凍干粉的量。重新配制的溶液可以在-15至-25 °C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)一周。因?yàn)橹匦屡渲坪蠡钚越档土�，所以要避免反�?fù)凍融。

重懸

可重懸于任意平衡鹽溶液（如，HBSS）

儲(chǔ)存及穩(wěn)定性

保存于密閉容器內(nèi)，置于干燥通風(fēng)處

其他說(shuō)明

僅用于生命科學(xué)研究。不可用于診斷。
裝運(yùn)條件可能會(huì)有所不同。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司

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