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技術(shù)文章

膠原酶D

點擊次數(shù):35 發(fā)布時間:2024/7/30 11:45:42
  

一般描述

膠原酶D是通過過濾、硫酸銨沉淀、透析和凍干而從溶組織梭菌的培養(yǎng)物中制備的。

特異性

膠原酶可降解天然膠原蛋白。梭菌蛋白酶、胰蛋白酶樣酶和中性蛋白酶也會降解其他蛋白質(zhì)。

應用

來自溶組織梭菌的膠原酶被廣泛用于解聚多種類型的組織(,肺、心臟、肌肉、骨骼、脂肪組織、肝臟、腎臟、軟骨、乳腺、胎盤、血管、腦、腫瘤),以及用于建立原代細胞培養(yǎng)系統(tǒng)的單細胞懸浮液的制備。當細胞表面蛋白的功能性和完整性很重要時,推薦使用膠原酶D。來自Roche的
梭菌膠原酶已用于從多種類型的組織中進行細胞的制備,如肝細胞、脂肪細胞、胰島、上皮細胞、肌肉細胞、內(nèi)皮細胞等。[1][2][3][4]然而,應根據(jù)經(jīng)驗確定每個批次的酶對破壞特定組織的適用性。

特點和優(yōu)勢

內(nèi)含物
凍干粉,未滅菌

單位定義

來自Roche的膠原酶以Wünsch單位(在+25°C下每分鐘用Wünsch底物形成μmol的產(chǎn)物)進行測定。
通常,膠原酶活性是以Mandl單位(在+37℃下5小時內(nèi)從膠原釋放的1 μmol亮氨酸)給出的。
不幸的是,兩個活性單位之間沒有統(tǒng)一的轉(zhuǎn)換因子,因為Mandl單位部分取決于膠原酶制劑中污染性蛋白酶的濃度,而這是一個不確定的變量。較純的膠原酶制劑相對于粗制劑在Mandl單位中實際上具有更低的比活性。梭菌制劑通常具有約1:1800的轉(zhuǎn)換因子(某個特定批次的梭菌膠原酶所含有的約0.15 Wünsch U/mg和250 Mandl U/mg)。

外形

凍干粉,未滅菌。

制備說明

激活劑:Ca2+
工作濃度:0.5 - 2.5mg/ml
儲存條件(工作溶液):-15至-25°C
Roche建議僅重懸需要立即使用的凍干粉的量。重新配制的溶液可以在-15至-25℃下儲存長達一周。因為重新配制后活性降低了,所以要避免反復凍融。

抑制劑:

膠原酶抑制劑:EDTA, EGTA, Cys, His, DTT,
膠原酶不會被血清所抑制。
梭菌蛋白酶抑制劑:TLCK
胰蛋白酶抑制劑:抑肽酶,胰蛋白酶抑制劑(蛋清,大豆)

酶活:
膠原酶活性:>0.15 U/mg (基于Wünsch) (+25°C, 4-苯基-偶氮芐基-氧基羰基-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg作為底物)
污染性酶活:胰蛋白酶,梭菌蛋白酶和總蛋白水解活性
膠原酶D具有正常至高的膠原酶活性,以及非常低的胰蛋白酶活性(通常<0.2單位/mg,BAEE作為底物)。

重懸

在任何平衡鹽溶液中重懸(HBSS)

儲存及穩(wěn)定性

避光

其他說明

僅用于生命科學研究。不可用于診斷。

原創(chuàng)作者:上海篤瑪生物科技有限公司

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