狗血清采用健康狗血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成，性狀為澄清液體，無噬菌體、低內(nèi)毒素，無溶血無異物無細菌真菌支原體霉形體衣原體等，適用于試驗室或生化科研相關(guān)試驗，滿足不同科研實驗的多種需求。狗血源以封閉的穿刺方式采自動物，產(chǎn)品經(jīng)3次100nm過濾，在凈化車間過濾包裝。經(jīng)嚴格檢測確保無支原體，細菌病毒檢測依據(jù)美國藥典（USP）和美國聯(lián)邦法規(guī)第九篇（9CFR），符合檢測標準。

狗血清和血漿的制備：

狗血清和狗血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：

1.狗血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。

2. 狗血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件同上）后所得的上清液即為血漿。初用者將上清移至另一清潔容器，吸出血漿時用毛細吸管貼著液面逐漸往下吸，切忌不能吸起細胞成分。

狗血清和狗血漿的主要區(qū)別：

1，血漿是離開血管的全血經(jīng)抗凝處理后，通過離心沉淀，所獲得的不含細胞成分的液體，其中含有纖維蛋白原（纖維蛋白原能轉(zhuǎn)換成纖維蛋白，具有凝血作用），若向血漿中加入鈣離子，血漿會發(fā)生再凝固，因此血漿中不含游離的鈣離子。

2，血清是離體的血液凝固之后，經(jīng)血凝塊聚縮釋出的液體，其中已無纖維蛋白原，但含有游離的鈣離子，若向其中再加入鈣離子，血清也不會再凝固。

3， 血漿與血清的另一個區(qū)別是：血清中少了很多的凝血因子，以及多了很多的凝血產(chǎn)物。另外，血清中含有特異性免疫抗體（如抗毒素或凝集素）的免疫血清（抗菌素血清）。簡單說血漿里含有血清和血細胞

狗血清（無菌過濾），注意事項：有少量蛋白質(zhì)結(jié)塊析出不影響使用。未融化或融化未經(jīng)搖勻的血清禁止直接放入高溫水浴內(nèi)加溫。減少血清重復(fù)凍融。血清在室溫或4℃冰箱內(nèi)放置過久會影響促細胞生長效果。

狗血清的解凍：

將血清從冰凍區(qū)中取出后（切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀），先置于2～8℃區(qū)域中使之融化，然后在室溫下使之全融。使用再預(yù)溫到將使用的溫度（如37℃），但必須注意的是，解凍過程中應(yīng)輕輕地搖晃均勻。血清在解凍過程中可能會出現(xiàn)少量絮狀或片狀析出物，主要是血清中脂蛋白的變性或是纖維蛋白（形成凝血的蛋白）析出，但這些析出物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

應(yīng)用

鉤端螺旋體外膜蛋白血清學(xué)診斷價值和CTB-OmpL1疫苗免疫保護作用評價實驗中為提高血清學(xué)檢測的敏感性和特異性，克隆、表達LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8，并以這4種重組蛋白為抗原，建立檢測馬和狗血清中相應(yīng)抗體的ELISA和狗血清中相應(yīng)抗體的LUMINEX法，為研制診斷鉤體病的新血清學(xué)檢測方法奠定實驗基礎(chǔ)。

應(yīng)用分子生物學(xué)方法，構(gòu)建CTB-OmpL1重組乳酸菌口服疫苗，并利用倉鼠模型評價其免疫保護作用，為研制新型疫苗奠定基礎(chǔ)。研究內(nèi)容與方法：

1.采用PCR方法，從鉤端螺旋體基因組DNA中分別擴增LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8基因片段，構(gòu)建原核表達載體LipL21-PET28/Rosetta,Loa22-PET28/Rosetta,LipL32-PGEX4T2/BL21，LigACon4-8–PET28/Rosetta，大量誘導(dǎo)表達重組菌，運用Ni+NTA及正負離子吸咐柱純化獲得重組蛋白,用Wester blot鑒定。

2.以重組蛋白LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8為抗原，建立檢測馬血清和狗血清中相應(yīng)抗體的ELISA，用建立的ELISA檢測大量臨床馬血清和狗血清并與傳統(tǒng)MAT比較，評價其診斷價值。

3.以重組蛋白LipL21,Loa22,LipL32和LigACon4-8為抗原，建立檢測狗血清中相應(yīng)抗體的Luminex法,檢測大量臨床狗血清中相應(yīng)抗體,并與傳統(tǒng)MAT比較，評價其診斷價值。

4.用基因工程技術(shù)，克隆、表達鉤端螺旋體重組蛋白CTB-OmpL1，轉(zhuǎn)入乳酸菌中制備CTB-OmpL1口服疫苗；制備倉鼠鉤體感染動物模型，通過該模型評價該口服疫苗的免疫保護作用。
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原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司