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消息:膠原酶 來源于溶組織梭菌@2024技術(shù)文獻(xiàn)已更新

點(diǎn)擊次數(shù):29 發(fā)布時間:2024/1/25 10:53:56
 消息:膠原酶 來源于溶組織梭菌@2024技術(shù)文獻(xiàn)已更新

 

 

 

 

別名:梭菌肽酶 A
C

AS號:9001-12-1

EC 號:3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)

EC 號:232-582-9

MDL編號:MFCD00130830

NACRES:NA.54

 

 

生物來源
Clostridium histolyticum

質(zhì)量水平
200

形式
powder

specific activity
≥125 CDU/mg solid
0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

分子量
68-130 kDa

technique(s)
cell culture | mammalian: suitable
single cell analysis: suitable

溶解性
TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble 0.05-0.1 mg/mL at 37 °C

適用性
suitable for release of physiologically active rat hepatocytes

application(s)
diagnostic assay manufacturing

運(yùn)輸
wet ice

儲存溫度
?20°C



消息:膠原酶 來源于溶組織梭菌@2024技術(shù)文獻(xiàn)已更新

應(yīng)用
來自組織溶梭菌的膠原酶已被用于:

制備用于消化組織的膠原酶溶液[1]
作為磷酸鹽緩沖生理鹽水的補(bǔ)充劑用于消化已切除的腸系膜脂肪組織[2]
作為羅斯韋爾公園紀(jì)念研究所1640培養(yǎng)基(RPMI-1640)的補(bǔ)充劑用于消化段[3]
用于消化子宮內(nèi)膜組織[4]
制備用于消化去被膜的睪丸的酶A和酶B。[5]
膠原酶已被用于制備動脈組織,用于研究晚期糖基化終產(chǎn)物(AGE)。該酶還與其他蛋白酶一起用于人、小鼠腎、人腦、肺上皮和許多其他組織的解聚。它在肝臟和灌注研究,胰腺消化和非實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞的分離中也是有效的。該酶經(jīng)過了肝細(xì)胞釋放的適用性測試,針對每只大鼠肝臟的100 mL總體積中的濃度大約為1 mg/mL。

適用于制備用于測序的單細(xì)胞懸液。

 

生化/生理作用

組織溶梭菌產(chǎn)生兩類膠原酶。梭菌膠原酶比哺乳動物膠原酶更高效。它在膠原三螺旋中的多個裂解位點(diǎn)進(jìn)行裂解。梭菌膠原酶與氣性壞疽中的細(xì)菌入侵有關(guān)。[6]
從組織中進(jìn)行細(xì)胞的有效釋放需要膠原酶和中性蛋白酶的作用。每摩爾的膠原酶可被四克的鈣原子(Ca2+)所激活。培養(yǎng)濾液中被認(rèn)為至少含有7種分子量在68-130kDa之間的不同蛋白酶。適pH為6.3-6.8。該酶通常用于消化組織樣品中的結(jié)締成分以釋放單個細(xì)胞。膠原酶處理可引起某些細(xì)胞的死亡。通常,使用0.1至5 mg/mL的濃度用于消化。反應(yīng)時間可從15分鐘至數(shù)小時,并在不引起過多細(xì)胞死亡的情況下達(dá)到令人滿意的細(xì)胞解離效果。優(yōu)選含有鈣和BSA的Krebs Ringer緩沖液,而且Zn2+是活性所必需的。
每摩爾膠原蛋白酶被4g原子鈣活化。 它被乙二醇-雙(β-氨基乙基醚)-N,NN′,N′-四乙酸,β-巰基乙醇、谷胱甘肽、巰基乙酸和8-羥基喹啉抑制。

注意

以原包裝形式,該產(chǎn)品在-20°C下可穩(wěn)定保存6年。在37℃、50℃和-20℃下30天內(nèi),F(xiàn)ALGPA或蛋白酶活性沒有損失。如果分液(10mg/mL)形式快速冷凍并且在-20℃下冷凍保存,粗膠原酶的溶液可保持穩(wěn)定。進(jìn)一步的凍融步驟會破壞溶液穩(wěn)定性。 當(dāng)在冰上保持時,該產(chǎn)品可在7小時內(nèi)保持100%活性。

單位定義

一個膠原蛋白消化單元(CDU)從牛跟腱膠原蛋白中釋放的肽鏈量和1.0 μ亮氨酸,5小時,pH7.4,37℃,在鈣離子存在下的茚三酮顏色相同。一個 FALGPA水解單元每分鐘,25℃,水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一個中性蛋白酶單元水解酪蛋白,產(chǎn)生顏色和1.0 μmole 酪氨酸每5小時,pH7.5,37℃下產(chǎn)生的相同。一個梭菌蛋白酶單元在DTT存在下,pH7.6,25℃,每分鐘水解1.0 μmole BAEE。

制備說明

溶液通常是在TESCA緩沖液(含有50mM TES、0.36mM氯化鈣,37℃時pH 7.4)中按1-2 mg/mL進(jìn)行制備。
該產(chǎn)品還含有梭菌蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶活性。

 


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