采用熒光法測(cè)定ADR，考察了操作液成分和pH值對(duì)測(cè)定的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：BSA濃度200mg/L，ADR濃度2．0u/mL，pH2．40，NaCl濃度0．5mol/L，氣體流速15mL/min，進(jìn)料體積8．0mL時(shí)，阿霉素的二次提取率可達(dá)70．3%。并且對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行了討論，ADR實(shí)現(xiàn)泡沫提取的主要?jiǎng)恿κ茿DR的疏水部分與BSA分子間發(fā)生的疏水作用力。

方法

利用CTAB/正辛醇：
三氯甲烷(4：1V/V)反膠團(tuán)體系對(duì)牛血清白蛋白(BSA)進(jìn)行相轉(zhuǎn)移中，通過(guò)對(duì)萃取體系水相的pH值、離子強(qiáng)度、兩液相的體積比、小分子糖(葡萄糖、蔗糖)及助表面活性劑(直鏈醇分子)等因素的改變，探討了BSA在陽(yáng)離子表面活性劑體系的萃取機(jī)理；
研究結(jié)果表明選擇合適的條件提取BSA時(shí)，萃取率可達(dá)到97%，反萃率達(dá)到了85%；找到實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白分離提純的有效方法。
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定法
分別取六只試管，其中一只加入1.0ml蒸餾水做空白，5只分別加入不同體積的濃度為100ug/ml牛血清清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，補(bǔ)充水到1.0ml。然后每只試管加入5.0ml考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，搖勻放置5min，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)595nm處測(cè)定吸光值。以A595吸光值為縱坐標(biāo)，牛血清清蛋白的ug數(shù)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體操作見(jiàn)下表。
蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定加樣
試劑空白12345
100ug/ml牛血清清蛋白/ml1.00.10.20.40.60.8
牛血清清蛋白/ug01020406080
去離子水/ml00.90.80.60.40.2
考馬斯亮藍(lán)G-250試劑/ml5.05.05.05.05.05.0
吸光值A(chǔ)595
2、蛋白樣品
配制濃度約100ug/ml的待測(cè)蛋白質(zhì)溶液。取一只試管加入1.0ml蒸餾水做空白，一支加入0.5ml待測(cè)蛋白質(zhì)溶液，補(bǔ)充水到1.0ml。然后每支試管加入5.0ml考馬斯亮藍(lán)G-250試劑，搖勻放置5min后，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)595nm處測(cè)定吸光值。用測(cè)得的吸光值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相當(dāng)于牛血清清蛋白的ug數(shù)量，計(jì)算出待測(cè)蛋白質(zhì)的含量。
在標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)樣品的測(cè)定時(shí)，為了減小誤差，每一個(gè)濃度的蛋白質(zhì)做3支平行管。
3、試劑配置
牛血清清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液結(jié)晶牛血清清蛋白或酪蛋白，預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法標(biāo)定該蛋白質(zhì)的百分含量或者根據(jù)牛血清清蛋白的消光系數(shù)是6.6來(lái)計(jì)算其百分含量。然后根據(jù)該蛋白的純度配置成濃度為100ug/ml的蛋白溶液。



 

 

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