酶聯(lián)吸附法（ELISA）的原理是利用抗原或與酶的結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原或，保持其活性，同時又保留酶的活性。將抗原或與酶連接成酶標(biāo)記抗原或，它既保留了活性，又保留了酶的活性；在測定時，把受檢標(biāo)本(含待測或抗原)和酶標(biāo)抗原或按一定程序與結(jié)合在固相載體表面的抗原或起反應(yīng)形成固相化抗原-酶復(fù)合物，用洗滌的使固相載體上形成的抗原-酶復(fù)合物與其它成分分離，結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的量成一定的比例，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被固相載體上的酶催化生為有色產(chǎn)物，通過定性或定量檢測有色產(chǎn)物的量即可確定樣品中待測的含量。

ELISA測定結(jié)果如何計算.ELISA測定結(jié)果計算如下：1.計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX )和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX)。2.兩個平均數(shù)的差(P-N)大于一個特定的數(shù)值，例如0.400，試驗才有效。3.3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。4.陽性判定值按下式計算：陽性判定值=NCX+0.05。5.標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。需要注意的是，試劑盒的常數(shù)只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。

ELISA試劑盒用法

雙夾心 本法主要用于檢測大分子抗原。現(xiàn)以檢測雞傳染性法氏囊�。↖BDV）的雙夾心ELISA為例介紹本法的操作程序。 ① 加包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 ③ 加酶標(biāo) → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 ④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液 ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。 雙夾心ELISA 此法與雙夾心ELISA的主要區(qū)別在于：它是采用酶標(biāo)抗檢查多種大分子抗原，它不僅不必標(biāo)記每一種，還可試驗的性。此法的基本程序為： ① 加（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 ② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ③ 加用非同種動物生產(chǎn)的特（Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ④ 加入酶標(biāo)抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 ⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。 競爭ELISA 此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射測定。其基本程序為： ① 包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 ② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原（對照孔僅加酶標(biāo)抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 ③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 ④ 用ELISA檢測儀測定OD值。

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