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豚鼠細(xì)胞角蛋白17(CK17/KRT17)ELISA試劑盒
酶免ELISA試劑盒是一種常用的學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),常用于抗原或的定量檢測(cè)。這種試劑盒利用酶聯(lián)吸附法(ELISA)技術(shù),將已知的抗原或吸附在固相載體表面,使酶標(biāo)記的抗原反應(yīng)在固相表面進(jìn)行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。ELISA試劑盒具有高靈敏度、高特、快速、易操作等優(yōu)點(diǎn),在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和化學(xué)等域廣泛應(yīng)用。
ELISA試劑盒的操作步驟如下:1.包被:用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml,酶標(biāo)板中每孔加入50μl,室溫、4℃或37℃過夜包被。2.洗滌:棄包被液(拍干,再用無塵紙吸干),用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次(每孔均要加滿),每次3min~5min。3.封閉:每孔加封閉液(1%BSA)250μl,37℃封閉2h。4.洗滌:用1×PBST洗滌液洗板3次,每次3min~5min。5.結(jié)合一抗:用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢,每孔100μl,要設(shè)立陰性對(duì)照,37℃孵育1.5h。6.洗滌:同上。7.結(jié)合酶標(biāo)二抗:每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同,可按說明書進(jìn)行)50μl,37℃孵育1h.8.洗滌:同上。9.顯色:每孔加底物溶液(TMB)50μl,置室溫避光顯色10min。10.待顯色后,每孔加入50μl終止液(2mol/L H2SO4)終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值,以確定水平。以上步驟僅供參考,具體操作請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況和產(chǎn)品說明書進(jìn)行。
ELISA試劑盒基于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng),以用于測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而則為純化抗原動(dòng)物后的多克隆和使用雜交瘤技術(shù)的單克隆,而抗原或的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成制備。ELISA試劑盒的作用ELISA試劑盒是一種用于體外定性檢測(cè)人或中的特定的試劑盒,例如抗人類戊型(HEV)IgMELISA檢劑盒。ELISA試劑盒具有靈敏度高、特好、操作簡(jiǎn)便、安全、快速等優(yōu)點(diǎn),可以用于檢測(cè)類因子、、等,在臨床診斷、科研和生物制品檢測(cè)等域具有廣泛的應(yīng)用。
雙夾心 本法主要用于檢測(cè)大分子抗原,F(xiàn)以檢測(cè)雞傳染性法氏囊。↖BDV)的雙夾心ELISA為例介紹本法的操作程序。 ① 加包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干 ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干 ③ 加酶標(biāo) → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干 ④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘,加終止液 ⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。 雙夾心ELISA 此法與雙夾心ELISA的主要區(qū)別在于:它是采用酶標(biāo)抗檢查多種大分子抗原,它不僅不必標(biāo)記每一種,還可試驗(yàn)的性。此法的基本程序?yàn)椋?① 加(Ab-1)包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干 ② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干 ③ 加用非同種動(dòng)物生產(chǎn)的特(Ab-2)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干 ④ 加入酶標(biāo)抗Ab-2(AB-3)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干 ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液 ⑥ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。 競(jìng)爭(zhēng)ELISA 此法主要用于測(cè)定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射測(cè)定。其基本程序?yàn)椋?① 包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干 ② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原(對(duì)照孔僅加酶標(biāo)抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干 ③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液 ④ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。
豚鼠細(xì)胞角蛋白17(CK17/KRT17)ELISA試劑盒
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