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聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔兩個碳原子，即每第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”體(proton sponge)，因此，非常容易結(jié)合帶負電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復合物顆粒，該顆粒與細胞表面陰離子結(jié)合，很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞；并且可抵御溶酶體的降解作用，從而提高核酸分子的表達水平。

查找：線性聚乙烯亞胺 分子量40000 @資料已更新

CAS
49553-93-7

分子式
(C2H5N)n . xHCl

分子量
40,000 (~22,000 free base)

熔點
73-75℃

溶解性
溶于冷水

不溶于
常用有機溶劑（乙醇、丙酮、四氫呋喃）

形式
白色固體粉末

生物毒性
未知

安全防護
手套，護目鏡，口罩

存儲
粉末至少可以保存一年， PEI內(nèi)含自由氨基，建議開封后4℃干燥保存，減緩氧化過程。

運輸
常溫運輸

特點
大量實驗數(shù)據(jù)反饋，細胞通用性好，有非常好的轉(zhuǎn)染效果，尤其對293，CHO細胞系有特別顯著的轉(zhuǎn)染效果。

轉(zhuǎn)染操作流程：(貼壁細胞轉(zhuǎn)染方法)

1. 接種細胞： 轉(zhuǎn)染一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL1002)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔加入的細胞量參考下圖表1，一般18-24小時（sf9細胞為3-4小時）后轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染時細胞匯合度應至少達到 70~80%以上。轉(zhuǎn)染更換為含5%血清的生長培養(yǎng)基。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。 （稀釋PEI和DNA的體積為培養(yǎng)體積的1/10-1/20, DNA濃度為1ug/ml）

3. 轉(zhuǎn)染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。轉(zhuǎn)染4-6小時（sf9細胞為2小時 )后，更換為生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細胞和分析結(jié)果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。 請自行確定 檢測時間。

5. 轉(zhuǎn)染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。 天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

轉(zhuǎn)染操作流程：(懸浮細胞轉(zhuǎn)染方法)

1. 轉(zhuǎn)染準備：懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調(diào)整細胞密度（例100mL培養(yǎng)瓶，1X10 6 cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng)，2~4小時后可以進行轉(zhuǎn)染。

2. 準備 DNA-PEI 復合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟需先使其升至室。用Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每1μg DNA需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25 min以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細胞：將PEI-DNA轉(zhuǎn)染復合物逐滴加入到細胞培養(yǎng)液中，搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測。

4. 孵育細胞和分析結(jié)果：轉(zhuǎn)染后一般24-72h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。 請自行確定 檢測時間。

5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量，有文獻表明轉(zhuǎn)染后24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考范圍（1:2—1:5）之間，可以增加蛋白產(chǎn)量，稀釋效應與 稀釋比率應根據(jù)經(jīng)驗確定。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司