試劑盒性能

1. 特高：由于是抗原的特結(jié)合，因此試驗(yàn)的特很高，能夠排除其他的。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗(yàn)的靈敏度大大，能夠檢測(cè)出微量的抗原或。

3. 操作簡(jiǎn)便：ELISA試驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單，容易，適合于大規(guī)模樣本檢測(cè)。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測(cè)各種抗原、和等生物分子。

樣品收集、處理及保存

1. ：使用不含熱原和內(nèi)的試管，操作中避免任何細(xì)胞，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 ELISA：本法主要用于檢測(cè)型特。該現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測(cè)。下面以AP2型的ELISA檢測(cè)法為例介紹其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 用200μl緩沖液進(jìn)行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加工作量1:4稀釋被檢豬100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加100μl工作量兔抗AP2型 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑦ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。本試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照、兔抗AP2型陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照。

實(shí)驗(yàn)原理

      試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

 綿羊凋亡相關(guān)因子配體(FASL/TNFSF6)ELISA試劑盒

操作步驟

1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲或抗原。

2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛白蛋白或羧纖維素)，非特蛋

白質(zhì)結(jié)合。

3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標(biāo)抗原或的樣本。

4)洗滌:去除未結(jié)合的。

5)檢測(cè)添加:加入對(duì)特定抗原有特的酶標(biāo)記檢測(cè)。

6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測(cè)。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。

8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類型的ELISA中需要)。

9) 讀數(shù):使用光譜光度計(jì)測(cè)定每個(gè)孔的吸光度(通常是在特定波長(zhǎng)下)，吸光度

與樣本中抗原或的濃度成正比。

競(jìng)爭(zhēng)ELISA：此法主要用于測(cè)定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射測(cè)定。其基本程序?yàn)椋孩?包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原（對(duì)照孔僅加酶標(biāo)抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液④ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量由酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來(lái)確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標(biāo)記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于快速、特高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測(cè)；其主要不足在于每種抗原都要進(jìn)行酶標(biāo)記，而且因?yàn)榭乖慕Y(jié)構(gòu)不同，還需應(yīng)用不同的結(jié)合。此外，試驗(yàn)中應(yīng)用酶標(biāo)抗原的量較多。

標(biāo)本的采集及保存

1.：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

2.：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

3.細(xì)胞物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注：標(biāo)本溶血會(huì)影響**檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。) 

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的品濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，利用品繪制的曲線，計(jì)算待測(cè)樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過(guò)計(jì)算待測(cè)樣品的濃度。

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，不同批號(hào)不可交換使用，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

ELISA：本法主要用于檢測(cè)型特。該現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測(cè)。下面以AP2型的ELISA檢測(cè)法為例介紹其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 用200μl緩沖液進(jìn)行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加工作量1:4稀釋被檢豬100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加100μl工作量兔抗AP2型 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑦ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。本試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照、兔抗AP2型陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司