試劑盒性能

1. 特高：由于是抗原的特結(jié)合，因此試驗(yàn)的特很高，能夠排除其他的。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗(yàn)的靈敏度大大，能夠檢測出微量的抗原或。

3. 操作簡便：ELISA試驗(yàn)操作相對簡單，容易，適合于大規(guī)模樣本檢測。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、和等生物分子。

樣品收集、處理及保存

1. ：使用不含熱原和內(nèi)的試管，操作中避免任何細(xì)胞，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 實(shí)驗(yàn)原理：試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕獲的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、品、HRP標(biāo)記的檢測，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

實(shí)驗(yàn)原理

      試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、品、HRP標(biāo)記的檢測，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

 綿羊半胱氨酰白三烯受體2(CYSLTR2)ELISA試劑盒

操作步驟

1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲或抗原。

2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛白蛋白或羧纖維素)，非特蛋

白質(zhì)結(jié)合。

3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標(biāo)抗原或的樣本。

4)洗滌:去除未結(jié)合的。

5)檢測添加:加入對特定抗原有特的酶標(biāo)記檢測。

6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。

8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類型的ELISA中需要)。

9) 讀數(shù):使用光譜光度計(jì)測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下)，吸光度

與樣本中抗原或的濃度成正比。

雙夾心ELISA：此法與雙夾心ELISA的主要區(qū)別在于：它是采用酶標(biāo)抗檢查多種大分子抗原，它不僅不必標(biāo)記每一種，還可試驗(yàn)的性。此法的基本程序?yàn)椋孩?加（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產(chǎn)的特（Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加入酶標(biāo)抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。

標(biāo)本的采集及保存

1.：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

2.：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

3.細(xì)胞物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注：標(biāo)本溶血會影響**檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。) 

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的品濃度及對應(yīng)的OD值，利用品繪制的曲線，計(jì)算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過計(jì)算待測樣品的濃度。

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

布ELISA：（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學(xué)者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型檢測技術(shù)。該是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為反應(yīng)提供較大的表面積，反應(yīng)的性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優(yōu)點(diǎn)。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對布氏桿菌抗原的檢測為例，C－ELISA的主要程序?yàn)椋孩?把抗布氏桿菌的包被（吸附）在聚脂布上，并經(jīng)洗滌及封閉；⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次；⑶ 加酶標(biāo)記的抗布氏桿菌，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次；⑷ 加入底物液顯色；⑸ 測定OD值。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司