使用說明書

試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預先包被白蛋白（ALB）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

雙夾心：本法主要用于檢測大分子抗原�，F(xiàn)以檢測雞傳染性法氏囊病（IBDV）的雙夾心ELISA為例介紹本法的操作程序。① 加包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干③ 加酶標 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

樣品收集、處理及保存

2.  ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

1. 酶標儀（450nm）

3. 37℃恒溫箱

競爭ELISA：此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射測定。其基本程序為：① 包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液④ 用ELISA檢測儀測定OD值。被結(jié)合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點在于快速、特高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測；其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結(jié)構(gòu)不同，還需應用不同的結(jié)合。此外，試驗中應用酶標抗原的量較多。

綿羊內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(NOS3/eNOS)ELISA試劑盒

操作注意事項

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

試劑的

洗板

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

5.  棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

雙夾心ELISA：此法與雙夾心ELISA的主要區(qū)別在于：它是采用酶標抗檢查多種大分子抗原，它不僅不必標記每一種，還可試驗的性。此法的基本程序為：① 加（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產(chǎn)的特（Ab-2)→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加入酶標抗Ab-2（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。

試劑盒性能

2.  靈敏度檢測濃度小于1.0 mg/mL。

4.  重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

6.  有效期：6個月

免責聲明

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司