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聯(lián)系人:楊燕燕
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技術(shù)文章
牛I類主要組織相容性復(fù)合體C(MHCC/HLA-C)ELISA試劑盒
試劑盒性能
1. 特高:由于是抗原的特結(jié)合,因此試驗的特很高,能夠排除其他的。
2. 靈敏度高:由于酶的放大作用,使得試驗的靈敏度大大,能夠檢測出微量的抗原或。
3. 操作簡便:ELISA試驗操作相對簡單,容易,適合于大規(guī)模樣本檢測。
4. 適用范圍廣:可以用于檢測各種抗原、和等生物分子。
樣品收集、處理及保存
1. :使用不含熱原和內(nèi)的試管,操作中避免任何細胞,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將和紅細胞迅速小心地分離。
2. :EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。
凡在本公司購買ELISA試劑盒,可提供免費待測服務(wù),視樣本數(shù)量而定出結(jié)果時間,一般一周內(nèi)出檢測結(jié)果!
實驗原理
試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、品、HRP標(biāo)記的檢測,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
牛I類主要組織相容性復(fù)C(MHCC/HLA-C)ELISA試劑盒
操作步驟
1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲或抗原。
2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛白蛋白或羧纖維素),非特蛋
白質(zhì)結(jié)合。
3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標(biāo)抗原或的樣本。
4)洗滌:去除未結(jié)合的。
5)檢測添加:加入對特定抗原有特的酶標(biāo)記檢測。
6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測。
7)底物添加:加入酶的底物,酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。
8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類型的ELISA中需要)。
9) 讀數(shù):使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下),吸光度
與樣本中抗原或的濃度成正比。
免責(zé)聲明:試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或生物體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān), 本公司概不負責(zé)。嚴格按照說明書操作,不同批號不可交換使用,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。
標(biāo)本的采集及保存
1.:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.細胞物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注:標(biāo)本溶血會影響**檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。)
結(jié)果分析
根據(jù)試劑盒提供的品濃度及對應(yīng)的OD值,利用品繪制的曲線,計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理,通過計算待測樣品的濃度。
免責(zé)聲明
試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或生物體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān), 本公司概不負責(zé)。
嚴格按照說明書操作,不同批號不可交換使用,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。
標(biāo)記:良好的酶結(jié)合物取決于兩個條件:即價的和高活性的酶。的活性和純度對制備標(biāo)記至關(guān)重要,因為特反應(yīng)隨活性和純度的而增強。在酶標(biāo)記中,的活性有所,故需要純度高、效及抗原親和力強的球蛋白使用親和層析提純的,可性,而且可稀釋使用,非特吸附。
原創(chuàng)作者:上海篤瑪生物科技有限公司