使用說明書

試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被白蛋白（ALB）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

ELISA：本法主要用于檢測型特。該現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽（PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測。下面以AP2型的ELISA檢測法為例介紹其操作程序：① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 用200μl緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干③ 加工作量1:4稀釋被檢豬100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加100μl工作量兔抗AP2型 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。本試驗同時設(shè)陰、陽性對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。

樣品收集、處理及保存

2.  ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

1. 酶標儀（450nm）

3. 37℃恒溫箱

結(jié)果判斷： 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

綿羊Smad同源物1(Smad1/MADH1)ELISA試劑盒

操作注意事項

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

試劑的

洗板

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

5.  棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

實驗原理：試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被小鼠4壬烯醛(4-HNE)捕獲的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的小鼠4壬烯醛(4-HNE)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒性能

2.  靈敏度檢測濃度小于1.0 mg/mL。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

6.  有效期：6個月

免責(zé)聲明

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司