兔白細(xì)胞分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)ELISA試劑盒

洗板：手工洗板：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此數(shù)次。 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)中。

操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的品可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，終結(jié)果乘以5才是樣本終濃度。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有組分使用充分搖勻。

6. 若中英文說明書有誤，請(qǐng)以中文說明書為準(zhǔn)。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟 1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 2. 設(shè)置品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；品孔各加不同濃度的品 50μL； 3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL； 4. 隨后品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè) 50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 5. 棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗 板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。 6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測(cè)定各孔的 OD 值。 結(jié)果判斷 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。 嚴(yán)格按照說明書操作，不同批號(hào)不可交換使用，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

 兔白細(xì)胞分化抗原CD40配體(CD40L/TNFSF5)ELISA試劑盒

間接ELISA：本法主要用于檢測(cè)。（DVH）的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；② DVH包被抗原、酶標(biāo)抗、陰性及陽性DVH參考；待檢鴨；③ ELISA檢測(cè)儀、加樣器、聚微量板。⑵ 步驟① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干② 加待檢 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干③ 加酶標(biāo) → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干④ 加底物液　→ 37℃ 30分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值，并計(jì)算出P/N比值。⑶ 結(jié)果判定　已知陽性與已知陰性的比值（P/N）≥2.1，而且已知陽性的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢與已知陰性的比值（P/N）≥2.1，而且待檢的OD值≥0.4，則判為陽性，否則判為陰性。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司