操作步驟：1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。2. 設(shè)置品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；品孔各加不同濃度的品 50μL；3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；4. 隨后品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè) 50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。5. 棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗 板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。

雙夾心：本法主要用于檢測(cè)大分子抗原。現(xiàn)以檢測(cè)雞傳染性法氏囊�。↖BDV）的雙夾心ELISA為例介紹本法的操作程序。① 加包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干③ 加酶標(biāo) → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

上海篤瑪生物科技有限公司ELISA試劑盒采用原裝進(jìn)口，一步孵育，一步洗板，操作時(shí)間僅需90分鐘，就能準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。剛開(kāi)起的酶聯(lián)板孔會(huì)含有少許水樣，此為正�，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響，您盡可放心使用。本司研發(fā)各種種屬ELISA試劑盒：1、細(xì)胞因子檢劑盒，如白介素、選擇素、集落因子，壞死因子，素，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，趨化因子，細(xì)胞因子受體，粘附分子，生長(zhǎng)因子，凋亡因子等等；2、肝纖維化檢測(cè)ELISA試劑盒，如纖維連接蛋白，質(zhì)酸，膠原，基質(zhì)金屬蛋白酶因子，基質(zhì)金屬蛋白酶，層粘蛋白等等；3、檢測(cè)ELISA試劑盒，如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應(yīng)蛋白等等；4、內(nèi)檢測(cè)ELISA試劑盒，如甲狀腺,,性,,,,生長(zhǎng)抑素,內(nèi)皮素,皮質(zhì)醇,骨鈣素,催乳素,皮質(zhì),促素,，雌三醇，5-色胺，17-等等；5、自身檢測(cè)ELISA試劑盒，如甲狀腺,鹽水可提取核抗原(ENA),抗核,DNA,抗心磷脂,類(lèi)因子,循環(huán)復(fù)合物,抗胰島細(xì)胞,胰蛋白酶原,Sm,大皰性類(lèi)皰,蛋白酶,短膜蟲(chóng)法,肝-,肝－－胃,肌內(nèi)膜,角蛋白,抗核,抗核糖體蛋白,抗聚角蛋白微絲蛋白,抗鏈O,抗,抗肌,抗線粒體,抗心肌,抗組蛋白,粒細(xì)胞彈性蛋白酶,皮膚,小球基底膜,小球基底膜,髓過(guò)氧化物酶,條紋肌,網(wǎng)硬蛋白,胃壁細(xì)胞,胃蛋白酶,,性滲透性增強(qiáng)因子等等；6、標(biāo)志物檢測(cè)ELISA試劑盒，如標(biāo)志物，組織多肽抗原，相關(guān)，細(xì)胞角蛋白片段，胃腸癌，鐵蛋白，糖鏈抗原，神經(jīng)特稀醇化酶，上皮膜抗原，，人抗小鼠，，甲胎蛋白，，，，大隱血檢測(cè)，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等；7、優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè)ELISA試劑盒，如早,新生兒TSH,檢測(cè),抗心磷脂,抗帶,抗帶,抗,抗,巨細(xì)胞,弓形體,風(fēng)疹,分娩,單核白細(xì)胞增多癥,單純皰疹,促素,促,便隱血,HCG等等；8、傳染病檢測(cè)ELISA試劑盒，如幽門(mén)螺桿菌,乙腦,,丙肝,丁肝,戊肝,庚肝,,,腺,微小B19,天皰,水-帶狀皰疹,生支原體,,沙眼,腮腺炎,人型支原體,,輪,,萊姆病,柯薩奇,抗解尿支原體,軍團(tuán)菌,結(jié)核,膠原,,甲肝,,急性炎尿胰蛋白酶,,呼吸道合胞,肝吸蟲(chóng),副流感,肺炎,帶狀皰疹,傳染性單核細(xì)胞增多癥,層粘蛋白,布魯氏桿菌,,,艾柯,EB,A族鏈球菌等等；9、特種蛋白檢測(cè)ELISA試劑盒，如球蛋白,抗鏈O-aso,類(lèi)因子RF,C反應(yīng)蛋白,微量白蛋白,β-2微球蛋白human,鐵蛋白,轉(zhuǎn)鐵蛋白transferrin等等.

兔磷酯酰特磷脂酶Cβ1(PLCβ1/PI-PLC)ELISA試劑盒

間接ELISA：本法主要用于檢測(cè)。（DVH）的ELISA為例，間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液；② DVH包被抗原、酶標(biāo)抗、陰性及陽(yáng)性DVH參考；待檢鴨；③ ELISA檢測(cè)儀、加樣器、聚微量板。⑵ 步驟① 加抗原包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加待檢 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干③ 加酶標(biāo) → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干④ 加底物液　→ 37℃ 30分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值，并計(jì)算出P/N比值。⑶ 結(jié)果判定　已知陽(yáng)性與已知陰性的比值（P/N）≥2.1，而且已知陽(yáng)性的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢與已知陰性的比值（P/N）≥2.1，而且待檢的OD值≥0.4，則判為陽(yáng)性，否則判為陰性。

ELISA：本法主要用于檢測(cè)IgM。由于IgM出現(xiàn)于感染早期，所以檢測(cè)出IgM，則可作為某種的早期診斷。ELISA根據(jù)所用標(biāo)記不同可分為標(biāo)記抗原、標(biāo)記、標(biāo)記抗ELISA等幾種，其中以標(biāo)記抗原ELISA比較有代表性，該的主要程序?yàn)椋孩?用抗u鏈（抗IgM重鏈）包被→37℃ 60分鐘后置4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加待檢 → 37℃ 2小時(shí)，洗滌三次、拋干③ 加酶標(biāo)抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

自從Engvall和Perlman(1971）報(bào)道建立酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以來(lái)，由于ELISA具有快速、、簡(jiǎn)便、易于化等優(yōu)點(diǎn)，使其迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。盡管早期的ELISA由于特不夠高而妨礙了其在實(shí)際中應(yīng)用的步伐，但隨著的不斷改進(jìn)、材料的不斷更新，尤其是采用基因工程制備包被抗原，采用針對(duì)某一抗原表位的單克隆進(jìn)行ELISA試驗(yàn)，都大大了ELISA的特，加之電腦化程度的ELISA檢測(cè)儀的使用，使ELISA更為簡(jiǎn)便實(shí)用和化，從而使其成為廣泛應(yīng)用的檢測(cè)。如ELISA已被廣泛應(yīng)用于多種和等的診斷。在動(dòng)物檢疫方面，ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽、藍(lán)舌病等的診斷中已為廣泛采用的。

結(jié)果判斷： 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

雙夾心：本法主要用于檢測(cè)大分子抗原�，F(xiàn)以檢測(cè)雞傳染性法氏囊病（IBDV）的雙夾心ELISA為例介紹本法的操作程序。① 加包被 → 4℃過(guò)夜，洗滌三次、拋干② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干③ 加酶標(biāo) → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液⑤ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

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