試劑盒性能

1. 特高：由于是抗原的特結(jié)合，因此試驗的特很高，能夠排除其他的。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大，能夠檢測出微量的抗原或。

3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易，適合于大規(guī)模樣本檢測。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、和等生物分子。

樣品收集、處理及保存

1. ：使用不含熱原和內(nèi)的試管，操作中避免任何細胞，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將和紅細胞迅速小心地分離。

2. ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 標記：良好的酶結(jié)合物取決于兩個條件：即價的和高活性的酶。的活性和純度對制備標記至關(guān)重要，因為特反應(yīng)隨活性和純度的而增強。在酶標記中，的活性有所，故需要純度高、效及抗原親和力強的球蛋白使用親和層析提純的，可性，而且可稀釋使用，非特吸附。

實驗原理

      試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標的的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

 人肽，CUB域，EGF樣1(SCUBE1)ELISA試劑盒

操作步驟

1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲或抗原。

2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛白蛋白或羧纖維素)，非特蛋

白質(zhì)結(jié)合。

3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標抗原或的樣本。

4)洗滌:去除未結(jié)合的。

5)檢測添加:加入對特定抗原有特的酶標記檢測。

6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。

8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類型的ELISA中需要)。

9) 讀數(shù):使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下)，吸光度

與樣本中抗原或的濃度成正比。

本試劑盒采用雙夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被捕獲的包被微孔中，依次加入標本、品、HRP標記的檢測，經(jīng)過溫育并洗滌。

標本的采集及保存

1.：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

2.：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

3.細胞物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注：標本溶血會影響**檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。) 

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的品濃度及對應(yīng)的OD值，利用品繪制的曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理，通過計算待測樣品的濃度。

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)， 本公司概不負責(zé)。

嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。

操作步驟：1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。2. 設(shè)置品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；品孔各加不同濃度的品 50μL；3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；4. 隨后品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測 50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。5. 棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗 板 5 次（也可用洗板機洗板）。6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司