人鈣依賴性蛋白激酶II劑2(CAMK2N2)ELISA試劑盒

使用說(shuō)明書

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被白蛋白（ALB）的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的白蛋白（ALB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

點(diǎn)ELISA：與常規(guī)的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡(jiǎn)便、節(jié)省抗原等優(yōu)點(diǎn)，而且結(jié)果可長(zhǎng)期保存；但其也有不足，主要是在結(jié)果判定上比較主觀，特不夠高等。該的主要操作程序?yàn)椋孩泡d體膜的預(yù)處理及抗原包被　取纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進(jìn)行壓圈。將陰性、陽(yáng)性抗原及被檢測(cè)抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使纖維素膜干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點(diǎn)加40－53個(gè)樣品，每個(gè)壓圈可加抗原液1－20μl。⑵ 封閉　將纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動(dòng)物、pH7.2或pH7.4的PBS。⑶ 加被檢　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢，37℃反應(yīng)一定時(shí)間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。⑷ 加酶標(biāo)，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，用洗滌液洗三次。⑸顯色　加入新鮮配制的底物液，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。⑹ 結(jié)果判定　以陽(yáng)性、陰險(xiǎn)作為對(duì)照，膜片出現(xiàn)深棕紅色點(diǎn)者為陽(yáng)性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。

試劑盒組成：自備物品1. 酶標(biāo)儀（450nm）2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒溫箱

樣品收集、處理及保存

1.  ：使用不含熱原和內(nèi)的試管，操作中避免任何細(xì)胞，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

本試劑盒采用雙夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被捕獲的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。

人鈣依賴性蛋白激酶II劑2(CAMK2N2)ELISA試劑盒

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  濃度為0的S0號(hào)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有組分使用充分搖勻。

試劑盒組成

注：品（S0-S5）濃度依次為：0、6.25、12.5、25、50、100 mg/mL

試劑的

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置品孔和樣本孔，品孔各加不同濃度的品50μL；

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制曲線：在Excel工作表中，以品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

布ELISA：（C－ELISA）　C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學(xué)者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型檢測(cè)技術(shù)。該是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為反應(yīng)提供較大的表面積，反應(yīng)的性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優(yōu)點(diǎn)。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對(duì)布氏桿菌抗原的檢測(cè)為例，C－ELISA的主要程序?yàn)椋孩?把抗布氏桿菌的包被（吸附）在聚脂布上，并經(jīng)洗滌及封閉；⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次；⑶ 加酶標(biāo)記的抗布氏桿菌，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次；⑷ 加入底物液顯色；⑸ 測(cè)定OD值。

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性：品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度檢測(cè)濃度小于1.0 mg/mL。

3.  特：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司