試劑盒性能

1. 特高：由于是抗原的特結(jié)合，因此試驗的特很高，能夠排除其他的。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大，能夠檢測出微量的抗原或。

3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易，適合于大規(guī)模樣本檢測。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、和等生物分子。

樣品收集、處理及保存

1. ：使用不含熱原和內(nèi)的試管，操作中避免任何細(xì)胞，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

實驗原理

      試劑盒采用雙一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、品、HRP標(biāo)記的檢測，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

 人谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ2(GSTθ2/GSTt2)ELISA試劑盒

操作步驟

1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲或抗原。

2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛白蛋白或羧纖維素)，非特蛋

白質(zhì)結(jié)合。

3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標(biāo)抗原或的樣本。

4)洗滌:去除未結(jié)合的。

5)檢測添加:加入對特定抗原有特的酶標(biāo)記檢測。

6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。

8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類型的ELISA中需要)。

9) 讀數(shù):使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下)，吸光度

與樣本中抗原或的濃度成正比。

辣根過氧化物酶：過氧化物酶（HRP）廣泛分布于植物中，辣根中含，從辣根中提取的稱辣根過氧化物酶（HRP），是由無色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構(gòu)成的一種糖蛋白（含糖量18%），分子量約40 000，約由300個酸組成，等電點為pH 3-9，催化反應(yīng)的適pH值因供氫體不同而稍有差異，一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的銨溶液。酶蛋白和輔基吸收光譜分別為275nm和403nm。

標(biāo)本的采集及保存

1.：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

2.：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

3.細(xì)胞物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注：標(biāo)本溶血會影響**檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。) 

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的品濃度及對應(yīng)的OD值，利用品繪制的曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過計算待測樣品的濃度。

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。

ELISA （Enzyme-Linkedimmunosorbent assay）的基礎(chǔ)是抗原或的固相化及抗原或的酶標(biāo)記。這一的基本原理是：①使抗原或結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其活性。②使抗原或與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或，這種酶標(biāo)抗原或既保留其活性，又保留酶的活力。在測定時，把待測樣本（測定其中的或抗原）和酶標(biāo)抗原或按不同的步驟與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復(fù)合物與其他分開結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢的量直接相關(guān)，所以可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺定性或定量分析。由于酶的催化速率很高，所以可地放大反應(yīng)效果，從而使測定達(dá)到很高的度。

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司