ELISA的發(fā)展史:

3√ ELISA試劑盒它使我們對以一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定變得輕而易舉,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

如:檢測限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

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ELISA實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

1、固相載體選擇

聚苯乙烯:具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。

聚氯乙烯:聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。

良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。

2、包被

①板孔的選擇:ELISA別的微孔板。

②抗體選擇:選擇支持ELISA實(shí)驗(yàn)的抗體,根據(jù)推薦濃度稀釋或摸索適濃度。

③包被緩沖液:pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液。

④包被溫度:2-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h。

⑤包被濃度:包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。

3、封閉

①包被之后一定要立即封閉(封閉非特異性抗體)。

②選擇效果較好的封閉劑(細(xì)胞培養(yǎng)BSA、Tween等)。

4、加樣及孵育

①加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

②孵育的時(shí)間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件,建議加樣孵育時(shí)使用shaker震蕩儀,推薦軌道直徑3mm,轉(zhuǎn)速在500±50rpm。

③檢測抗體、酶標(biāo)物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時(shí)間嚴(yán)格根據(jù)說明書提示。

④洗板對于ELISA來說,是其關(guān)鍵的一步,保證ELISA的特異性。

⑤封板膜一定要一次一換,切勿二次甚至多次使用,以防交叉污染。

5、顯色和終止

①使用需檢查,底物在加入96孔板之應(yīng)為無色透明。

②顯色底物需現(xiàn)配現(xiàn)用,避免污染。

③孵育時(shí)間,說明書上為參考范圍,具體需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件自行摸索�？蓞⒖紭�(biāo)曲濃度 孔的顏色,變?yōu)樗{(lán)色較明顯時(shí)即可。

實(shí)驗(yàn)器材使用小技巧

1、塞瓶口時(shí)消毒,右手拇指、食指塞進(jìn)膠皮內(nèi),將塞旋入消毒瓶口內(nèi),瓶口再消毒瓶直           立火焰方,雙手拇指、中指固定瓶位,雙手食指將膠皮外翻,后用消毒紙包裝

3、瓶管、蓋的使用要求同塞,需使用同一蓋使用面放在酒精棉球上,套蓋,蓋使用面                    火焰消毒

化學(xué)實(shí)驗(yàn)室守則:
1. 實(shí)驗(yàn)室要保持安靜,嚴(yán)禁大聲喧嘩、吵鬧。
2. 在實(shí)驗(yàn),要預(yù)先作好實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備,進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí),要有秩序,按規(guī)定的座位就座。
3. 實(shí)驗(yàn),必須了解清楚實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、目的、要求和實(shí)驗(yàn)步驟。
4. 實(shí)驗(yàn)開始時(shí),應(yīng)先查點(diǎn)儀器、產(chǎn)品是否齊全,不得隨意調(diào)換,如發(fā)現(xiàn)問題,及時(shí)報(bào)告。
5. 實(shí)驗(yàn)必須按步驟進(jìn)行,并仔細(xì)觀察,做好記錄,實(shí)驗(yàn)后后及時(shí)寫好實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
6. 實(shí)驗(yàn)時(shí),要愛護(hù)儀器,節(jié)省產(chǎn)品,由于違反操作規(guī)程而損壞丟失的儀器,必須賠償。
7. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束,要將儀器整理或清洗,保持桌面,室內(nèi)的整潔后才能離開。

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