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查找：牛腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白(ACD)ELISA試劑盒

點擊次數(shù)：27 發(fā)布時間：2023/12/26 14:30:13

一、牛腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白(ACD)ELISA試劑盒實驗原理

是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預先包被人胰島素受體α(INSRA)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰島素受體α(INSRA)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

二、樣本處理要求

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能人上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

三、ELISA試劑盒組成

試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1個	1個
酶標包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
標準品：36U/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
標準品稀釋液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶標試劑	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
樣品稀釋液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）

牛腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白(ACD)ELISA試劑盒

五、注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以準確結(jié)果。所有試劑都在使用達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 實驗還需要酶標儀（450nm），37℃恒溫箱，加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。

11. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

12. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

13. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

六、操作步驟

	1. 對應板孔中加入100μL標準品工作液或樣本，37℃孵育90分鐘
	2. 棄掉板內(nèi)液體后，立即加入100μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘
	3. 棄掉板內(nèi)液體，洗板3次
	4. 每孔加入100μL HRP酶結(jié)合物工作液，37℃孵育30分鐘，棄掉板內(nèi)液體，洗板5次
	5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分鐘左右
	6. 每孔加入50μL終止液
	7. 立即在450nm波長下讀數(shù)，處理數(shù)據(jù)