選擇一款合適的酶標板，是ELISA實驗成功的 步，然而很多人卻忽略了這一點。大家在做實驗時往往只考慮實驗本身，卻不知道產(chǎn)品往往對實驗也有很大影響。合適的選擇產(chǎn)品，將有助于實驗的成功進行。我們在進行ELISA實驗的時候通�？紤]以下這些因素：一：孔底的形狀：現(xiàn)在的廠家均將酶標孔設計成立的柱狀，適當?shù)卦龃罂着c孔之間的距離，使之能立分開，從而 程度地減少交叉污染。不同種類的酶標板其孔底的形狀是不同的。以下是一些常見孔底形狀：平底：底部水平，也叫F底。光透過底部不會發(fā)生偏折，可以 程度的透光。應用于因可視性或其他原理需要用到圓底的實驗。圓底：也叫U底，提供 的清洗效果以及混合型能，適合需要測試沉淀物的應用。C型底：介于平底和圓底之間能夠提供好的清洗效果，同時結(jié)合了平底的優(yōu)點。錐型底：又稱V底，適用于取樣以及儲存微量樣本，以獲得 小容量的回收。二：酶標板的顏色：酶標板的顏色有三種：透明、黑色、白色。絕大多數(shù)ELISA都選擇透明板作為實驗材料。白色和黑色的酶標板一般用于發(fā)光檢測。黑色的酶標板自身會有光吸收，所以其信號要弱于白色的酶標板。黑色的酶標板一般用于檢測較強的光，如熒光檢測；相反，白色的酶標板可用于較弱的光檢測，常用于一般的化學發(fā)光和底物顯色（如雙熒光素酶報告基因分析）。三：酶標板的材質(zhì)：常見的材質(zhì)有聚乙烯（polyethylene,PE），聚丙烯 （polypropylene,PP），聚苯乙烯（Polystyrene,PS），聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸酯（Polycarbonate,PC）。ELSIA中應用廣的材料是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯質(zhì)軟板薄，可剪割，價格低廉。缺點是光潔度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相應的背景值也會有所增加。通常要在酶標板表面進行離子接枝處理，在聚合物表面引入醛基、氨基、環(huán)氧基等活性官能團，提高基體表面的性能。四：不同的結(jié)合機理：包被物質(zhì)與板底表面的有效結(jié)合是ELISA中至關(guān)重要的一步。因此，在實驗開始應仔細分析待包被物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點與化學特性，以選擇適當?shù)拿笜税濉Ｒ话銇碚f，包被物質(zhì)與板底有以下幾種結(jié)合方式：被動吸附、共價結(jié)合和親和捕獲。被動吸附（Passive Adsorption）：被動吸附的機理比較復雜，包被物質(zhì)與板底之間的結(jié)合主要依靠分子間作用力（范德華力）和氫鍵。在絕大多數(shù)ELISA中，包被物質(zhì)與板底的結(jié)合都是依靠被動吸附來完成的。一般來說，中等分子量及大分子量的抗原（或抗體）與板底之間的結(jié)合是依靠被動吸附來完成的。在挑選酶標板時通常要考慮板底表面的疏水性/親水性特征。下表中列出了不同親水性的板底表面的適用范圍及用途：

操作步驟 1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 2. 設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL； 3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL； 4. 隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 50μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗 板 5 次（也可用洗板機洗板）。 6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。 結(jié)果判斷 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

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綿羊硫氧還蛋白還原酶1(TrxR1)ELISA試劑盒

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