選擇一款合適的酶標(biāo)板，是ELISA實(shí)驗(yàn)成功的 步，然而很多人卻忽略了這一點(diǎn)。大家在做實(shí)驗(yàn)時(shí)往往只考慮實(shí)驗(yàn)本身，卻不知道產(chǎn)品往往對(duì)實(shí)驗(yàn)也有很大影響。合適的選擇產(chǎn)品，將有助于實(shí)驗(yàn)的成功進(jìn)行。我們?cè)谶M(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候通常考慮以下這些因素：一：孔底的形狀：現(xiàn)在的廠家均將酶標(biāo)孔設(shè)計(jì)成立的柱狀，適當(dāng)?shù)卦龃罂着c孔之間的距離，使之能立分開，從而 程度地減少交叉污染。不同種類的酶標(biāo)板其孔底的形狀是不同的。以下是一些常見孔底形狀：平底：底部水平，也叫F底。光透過底部不會(huì)發(fā)生偏折，可以 程度的透光。應(yīng)用于因可視性或其他原理需要用到圓底的實(shí)驗(yàn)。圓底：也叫U底，提供 的清洗效果以及混合型能，適合需要測(cè)試沉淀物的應(yīng)用。C型底：介于平底和圓底之間能夠提供好的清洗效果，同時(shí)結(jié)合了平底的優(yōu)點(diǎn)。錐型底：又稱V底，適用于取樣以及儲(chǔ)存微量樣本，以獲得 小容量的回收。二：酶標(biāo)板的顏色：酶標(biāo)板的顏色有三種：透明、黑色、白色。絕大多數(shù)ELISA都選擇透明板作為實(shí)驗(yàn)材料。白色和黑色的酶標(biāo)板一般用于發(fā)光檢測(cè)。黑色的酶標(biāo)板自身會(huì)有光吸收，所以其信號(hào)要弱于白色的酶標(biāo)板。黑色的酶標(biāo)板一般用于檢測(cè)較強(qiáng)的光，如熒光檢測(cè)；相反，白色的酶標(biāo)板可用于較弱的光檢測(cè)，常用于一般的化學(xué)發(fā)光和底物顯色（如雙熒光素酶報(bào)告基因分析）。三：酶標(biāo)板的材質(zhì)：常見的材質(zhì)有聚乙烯（polyethylene,PE），聚丙烯 （polypropylene,PP），聚苯乙烯（Polystyrene,PS），聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸酯（Polycarbonate,PC）。ELSIA中應(yīng)用廣的材料是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯質(zhì)軟板薄，可剪割，價(jià)格低廉。缺點(diǎn)是光潔度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相應(yīng)的背景值也會(huì)有所增加。通常要在酶標(biāo)板表面進(jìn)行離子接枝處理，在聚合物表面引入醛基、氨基、環(huán)氧基等活性官能團(tuán)，提高基體表面的性能。四：不同的結(jié)合機(jī)理：包被物質(zhì)與板底表面的有效結(jié)合是ELISA中至關(guān)重要的一步。因此，在實(shí)驗(yàn)開始應(yīng)仔細(xì)分析待包被物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與化學(xué)特性，以選擇適當(dāng)?shù)拿笜?biāo)板。一般來(lái)說，包被物質(zhì)與板底有以下幾種結(jié)合方式：被動(dòng)吸附、共價(jià)結(jié)合和親和捕獲。被動(dòng)吸附（Passive Adsorption）：被動(dòng)吸附的機(jī)理比較復(fù)雜，包被物質(zhì)與板底之間的結(jié)合主要依靠分子間作用力（范德華力）和氫鍵。在絕大多數(shù)ELISA中，包被物質(zhì)與板底的結(jié)合都是依靠被動(dòng)吸附來(lái)完成的。一般來(lái)說，中等分子量及大分子量的抗原（或抗體）與板底之間的結(jié)合是依靠被動(dòng)吸附來(lái)完成的。在挑選酶標(biāo)板時(shí)通常要考慮板底表面的疏水性/親水性特征。下表中列出了不同親水性的板底表面的適用范圍及用途：

操作步驟 1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL； 3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL； 4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗 板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。 6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。 結(jié)果判斷 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

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