檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的標(biāo)準(zhǔn)品可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，終結(jié)果乘以5才是樣本終濃度。

4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用充分搖勻。

6. 若中英文說(shuō)明書(shū)有誤，請(qǐng)以中文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

試劑盒組成

名稱                96 孔配置         48 孔配置            備注

微孔酶標(biāo)板       12 孔×8 條        12 孔×4 條          無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品              0.5mL               0.5mL             按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液      6mL                 3mL              按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

樣本稀釋液         6mL                 3mL              按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

檢測(cè)抗體-HRP     6mL                 3mL                 無(wú)

20×洗滌緩沖液    20mL               20mL             按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

底物 A              6mL                 3mL                  無(wú)

底物 B              6mL                 3mL                  無(wú)

終止液              6mL                 3mL                   無(wú)

封板膜              2 張                 2 張                  無(wú)

說(shuō)明書(shū)              1 份                 1 份                  無(wú)

自封袋              1 個(gè)                 1 個(gè)                  無(wú)

操作步驟 

1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；

3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；

4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗 板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，不同批號(hào)不可交換使用，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。

本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。

用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

此套件的交貨時(shí)間為2-3天。

*保存溫度：2 - 8 C。

*保質(zhì)期：6個(gè)月。

*國(guó)內(nèi)快遞.

凡在本公司購(gòu)買ELISA試劑盒，可提供免費(fèi)待測(cè)服務(wù)，視樣本數(shù)量而定出結(jié)果時(shí)間，一般一周內(nèi)出檢測(cè)結(jié)果！

原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司