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推薦：兔B細(xì)胞分化因子(BCDF) ELISA 試劑盒@2023已更新推薦

點(diǎn)擊次數(shù)：32 發(fā)布時(shí)間：2023/12/22 12:42:13
 

兔B細(xì)胞分化因子(BCDF) ELISA 試劑盒




    選擇一款合適的酶標(biāo)板，是ELISA實(shí)驗(yàn)成功的步，然而很多人卻忽略了這一點(diǎn)。大家在做實(shí)驗(yàn)時(shí)往往只考慮實(shí)驗(yàn)本身，卻不知道產(chǎn)品往往對(duì)實(shí)驗(yàn)也有很大影響。合適的選擇產(chǎn)品，將有助于實(shí)驗(yàn)的成功進(jìn)行。我們?cè)谶M(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候通�？�慮以下這些因素:


一:孔底的形狀:
    現(xiàn)在的廠家均將酶標(biāo)孔設(shè)計(jì)成立的柱狀，適當(dāng)?shù)卦龃罂着c孔之間的距離，使之能立分開，從而程度地減少交叉污染。不同種類的酶標(biāo)板其孔底的形狀是不同的。以下是一些常見孔底形狀:
平底:底部水平，也叫F底。光透過底部不會(huì)發(fā)生偏折，可以程度的透光。應(yīng)用于因可視性或其他原理需要用到圓底的實(shí)驗(yàn)。
圓底:也叫U底，提供的清洗效果以及混合型能，適合需要測(cè)試沉淀物的應(yīng)用。
C型底:介于平底和圓底之間能夠提供好的清洗效果，同時(shí)結(jié)合了平底的優(yōu)點(diǎn)。
錐型底:又稱V底，適用于取樣以及儲(chǔ)存微量樣本，以獲得小容量的回收。

二:酶標(biāo)板的顏色:
    酶標(biāo)板的顏色有三種:透明、黑色、白色。絕大多數(shù)ELISA都選擇透明板作為實(shí)驗(yàn)材料。白色和黑色的酶標(biāo)板一般用于發(fā)光檢測(cè)。黑色的酶標(biāo)板自身會(huì)有光吸收，所以其信號(hào)要弱于白色的酶標(biāo)板。黑色的酶標(biāo)板一般用于檢測(cè)較強(qiáng)的光，如熒光檢測(cè);相反，白色的酶標(biāo)板可用于較弱的光檢測(cè)，常用于一般的化學(xué)發(fā)光和底物顯色(如雙熒光素酶報(bào)告基因分析)。



三:酶標(biāo)板的材質(zhì):
常見的材質(zhì)有聚乙烯(polyethylene,PE)，聚丙烯(polypropylene,PP)，聚苯乙烯(Polystyrene,PS)，聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸(Polycarbonate,PC)。ELSIA中應(yīng)用廣的是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯質(zhì)軟板薄，可剪割，價(jià)格低廉。缺點(diǎn)是光潔度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相應(yīng)的背景值也會(huì)有所增加。通常要在酶標(biāo)板表面進(jìn)行離子接枝處理，在聚合物表面引入醛基、氨基、環(huán)氧基等活性官能團(tuán)，提高基體表面的性能。

四:不同的結(jié)合機(jī)理:
包被物質(zhì)與板底表面的有效結(jié)合是ELISA中至關(guān)重要的一步。因此，在實(shí)驗(yàn)開始應(yīng)仔細(xì)分析待包被物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與化學(xué)特性，以選擇適當(dāng)?shù)拿笜?biāo)板。一般來(lái)說(shuō)，包被物質(zhì)與板底有以下幾種結(jié)合方式:被動(dòng)吸附、共價(jià)結(jié)合和親和捕獲。被動(dòng)吸附(Passive Adsorption):被動(dòng)吸附的機(jī)理比較復(fù)雜，包被物質(zhì)與板底之間的結(jié)合主要依靠分子間作用力(范德華力)和氫鍵。在絕大多數(shù)ELISA中，包被物質(zhì)與板底的結(jié)合都是依靠被動(dòng)吸附來(lái)完成的。一般來(lái)說(shuō)，中等分子量及大分子量的抗原(或抗體)與板底之間的結(jié)合是依靠被動(dòng)吸附來(lái)完成的。在挑選酶標(biāo)板時(shí)通常要考慮板底表面的疏水性/親水性特征。下表中列出了不同親水性的板底表面的適用范圍及用途:







基本步驟
 
1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲抗體或抗原。
2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛血清白蛋白或羧甲基纖維素)，阻止非特異性蛋
白質(zhì)結(jié)合。
3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標(biāo)抗原或抗體的樣本。
4)洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì)。
5)檢測(cè)抗體添加:加入對(duì)特定抗原有特異性的酶標(biāo)記檢測(cè)抗體。
6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測(cè)抗體。
7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。
8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類型的ELISA中需要)。
9) 讀數(shù):使用光譜光度計(jì)測(cè)定每個(gè)孔的吸光度(通常是在特定波長(zhǎng)下)，吸光度
與樣本中抗原或抗體的濃度成正比。





試劑盒性能：

1. 檢測(cè)范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。
2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于0.78 nmol/L。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

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原創(chuàng)作者：上海篤瑪生物科技有限公司

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