兔XII B組磷脂酶A2(PLA2G12B) ELISA 試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

1. 抗體或抗原的吸附：將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上，常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán)，能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。

2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合：將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力，能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。

3. 底物顯色反應(yīng)：當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí)，酶能夠催化底物分解，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度，可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。

試劑盒性能

1. 檢測(cè)范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于0.78 nmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

實(shí)驗(yàn)所需自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

試劑盒組成

 操作步驟

1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；

3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；

4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗 板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 所有孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。

結(jié)果分析

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

注意事項(xiàng)

1. 試劑盒的質(zhì)量：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒，確保試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

2. 嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要嚴(yán)格控制溫度、pH值、離子強(qiáng)度等條件，以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3. 避免交叉污染：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要避免交叉污染，確保每個(gè)步驟使用的試劑和材料都是清潔無(wú)污染的。

4. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：實(shí)驗(yàn)操作要標(biāo)準(zhǔn)化，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，避免人為誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

5. 定期校準(zhǔn)：定期對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。