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專題:兔促生長激素釋放激素(GHRH) ELISA 試劑盒 @2023動(dòng)態(tài)已更新
兔促生長激素釋放激素(GHRH) ELISA 試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
實(shí)驗(yàn)所需自備物品
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.5mL | 0.5mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
檢測抗體-HRP | 6mL | 3mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 20mL | 20mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無 |
底物 B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 無 |
自封袋 | 1 個(gè) | 1 個(gè) | 無 |
操作步驟
兔促生長激素釋放激素(GHRH) ELISA 試劑盒
結(jié)果分析
1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖,如設(shè)置復(fù)孔,則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 推薦使用業(yè)的曲線制作軟件,如curve expert 1.3或1.4,在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,乘以稀釋倍數(shù);亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測,計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒的質(zhì)量:選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒,確保試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
2. 嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件:實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格控制溫度、pH值、離子強(qiáng)度等條件,以實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3. 避免交叉污染:實(shí)驗(yàn)過程中要避免交叉污染,確保每個(gè)步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。
4. 標(biāo)準(zhǔn)化操作:實(shí)驗(yàn)操作要標(biāo)準(zhǔn)化,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作,避免人為誤差對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
5. 定期校準(zhǔn):定期對實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn),確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
6. 保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù):實(shí)驗(yàn)過程中要保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),以便后續(xù)分析和處理。
兔動(dòng)力蛋白受體2(PKR2) ELISA 試劑盒 |
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原創(chuàng)作者:上海篤瑪生物科技有限公司