產(chǎn)品展示
RANTES/CCL5,小鼠正常T細胞表達和分泌因子ELISA試劑盒
點擊次數(shù)：100發(fā)布時間：2015/6/27 11:56:10
更新日期：2015/6/27 11:56:10
所 在 地：美洲
產(chǎn)品型號：
品牌名稱：R&D
優(yōu)質供應
詳細內容
Elisa試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
改良雙抗體夾心法：本法是雙抗體夾心法的一種改良形式，也是用于測定抗原的
本法首先是將特異性抗體a包被于固相載體，經(jīng)洗滌加入含有欲測抗原之待檢樣品。經(jīng)孵育洗滌后再加一次未標記的特異性抗體b，而這次加入的抗體b于次包被于固相載體上的特異性抗體a對被測抗原來說都是特異性的，但不是用同種動物免疫制備的，否則可出現(xiàn)非特異性反應。經(jīng)孵育洗滌后，再加酶標記抗b抗體，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色進行測定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此，放大的倍數(shù)更高，故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時避免標記特異性抗體，而另一優(yōu)點是只要標記一種抗抗體，即可達到多種應用。
用于測定抗原的尚有第4種叫做抑制性測定法（見圖4），它是先用抗原包被固相載體，然后分為二組，一組加入用參考抗體和被檢標本混合孵育后的混合溶液，假如標本中不含抗原，則參考抗體未被結合。因此它可以和包被于固相載體上的抗原結合。如標本中含有抗原，則抗原先與參考抗體結合，故參考抗體不再與包被于固相載體上的抗原結合。對加入酶結合物（抗球蛋白）和底物僅顯示剩余結合的抗體量。再與另一組不加待檢標本的參考系統(tǒng)比較，被檢標本對底物顯色的抑制程度與標本中所含抗原量成比例，二者之差，即為欲測抗原的量。
小鼠正常T細胞表達和分泌因子ELISA試劑盒實驗前的準備
1仔細閱讀說明書
2確定試劑盒在有效期內
3按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)
4標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內無法實驗者，注意低溫保存
5準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等
6根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量
7按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑
小鼠正常T細胞表達和分泌因子ELISA試劑盒操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：檢測濃度小于1.0pg/ml。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月
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