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優(yōu)質供應
詳細內容
英文名稱：T4 DNA Ligase
CAS號：9015-85-4
分子量：55.3kDa，單體
級別： BR
來源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
濃度：30Weiss u/ul(6000CEU/ul）
活性定義：是指在ATP-PPi交換反應中，37℃、30分鐘內將1nmol [32PPi]轉換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個weiss單位相當于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位：20ul反應體系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產物所需的酶量）
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL(PH7.6), 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液組分：20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%(v/v)甘油
10×T4 DNA Ligase緩沖液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP(PH7.5,25℃)
抑制劑：當反應體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時，可強烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意：T4 DNA Ligase與DNA結合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現象，電泳前需處理樣本或分子量標準。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉化時，連接產物的體積不得超過感受態(tài)細胞體積中的10%；電轉化之前，先用lvfang抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經乙醇沉淀純化抽提產物
質量控制：測試表明無內切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測：粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5＇磷酸基團和3＇-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途：生化研究。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復合體中缺口的修復；連接酶介導的RNA檢測；位點特異性突變；擴增片段長度多態(tài)性
保存： -20°C
1. 穩(wěn)定性：連續(xù)觀測，每日試驗；熱加速試驗。
2. 反應靈敏度：直接計算單位濃度反應物的吸光度變化或變化率。
3. 精密度：按照NCCLS EP5-A進行。
4. 準確度：按照NCCLS EP9-A2 進行。
5. 線性范圍：按照NCCLS EP6-A 進行。
6. 基質效應：通過回收試驗確定
7. 抗干擾性：按照NCCLS EP7-A進行。
接觸“T4 DNA連接酶”注意事項：
健康危害：吞咽有害。造成皮膚刺激。造成嚴重眼刺激。可能引起呼吸道刺激。
侵入途徑：經口、經皮、吸入
急救措施：
1）皮膚接觸：立即脫去污染的衣著，用大量流動清水沖洗 20～30 分鐘。如有不適感，就醫(yī)。
2）眼睛接觸：立即提起眼瞼，用大量流動清水或生理鹽水徹底沖洗10～15分鐘。如有不適感，就醫(yī)。
3）吸入：迅速脫離現場至空氣新鮮處。保持呼吸道通暢。如呼吸困難，給輸氧。呼吸、心跳停止，立即進行心肺復蘇術。
就醫(yī)。
4）食入：飲水，禁止催吐。如有不適感，就醫(yī)。
5）T4 DNA連接酶的保管
1 化學試劑的保管應視其性質而定
一般試劑可保存在玻璃瓶內; 對玻璃有強烈腐蝕作用的試劑，如氫氟酸、氫氧化鈉應保存在聚乙烯塑料瓶內; 易被空氣氧化、分化、潮解的試劑應密封保存;易感光分解的試劑應用有色玻璃瓶貯存并藏于暗處; 易受熱分解及低沸點溶劑，應存于冷處; 劇毒試劑應存于保險箱; 有放射性的試劑應存于鉛罐中。
2做好化學試劑的經常性保養(yǎng)工作
如果化學試劑保管不當，就會失效變質，影響實驗的效果，并造成物質的浪費，甚至有時還會發(fā)生事故。因此，科學地保管好試劑對于保證實驗順利進行，獲得 可靠的實驗數據具有非常重要的意義�；瘜W試劑的變質，大多數情況是因為受外界條件的影響，如空氣中的氧氣、二氧化碳、水蒸氣、空氣中的酸堿性物質以及環(huán)境 溫度、光照等，都可使化學試劑發(fā)生氧化、還原、潮解、風化、析晶、稀釋、銹蝕、分解、揮發(fā)、升華、聚合、發(fā)霉、變色以及燃爆等變化。經常檢查儲存中的化學 試劑的存放狀況發(fā)現實際起過的儲存期或變質應及時報告，并按規(guī)定妥善處理 ( 降級使用或報廢) 和銷帳。在正常儲存條件下，一般化學試劑貯有不宜超過2年，基準試劑不超1年。
為了避免環(huán)境和其他因素的干擾，所有化學試劑一經取出不得放回貯有容器: 屬于必須回收的試劑或指定、退庫、的試劑，必須另設專用容器回收或貯存，具有吸潮性或易氧化，易變質的化學試試劑必須密封保存，避免吸濕解，氧化或變質。 定期盤點，核對出現差錯應及時檢查原因，并報主管領導或部門處理。
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