載脂蛋白E抗體
資料參考產(chǎn)品名稱 載脂蛋白E抗體
產(chǎn)品縮寫(xiě) ApoE
蛋 白 名 Apolipoprotein E
別 稱 AD2,LPG,LDLCQ5,Apo E,Apo-E
來(lái) 源 小鼠
特 異 性 抗人
分 子 量 36kDa
克隆類型 單克隆抗體:IgG1;克隆號(hào):1H4
應(yīng) 用 IH(P)免疫組化(石蠟);FC流式細(xì)胞檢測(cè);ELISA
成 分 Ascitic fluid containing 0.03% sodium azide.
免 疫 原 Purified recombinant fragment of human ApoE expressed in E. Coli.
保存條件 連續(xù)使用時(shí)4°C存儲(chǔ),保質(zhì)期六個(gè)月;長(zhǎng)期存儲(chǔ)時(shí)建議分裝為10ul以上小包裝-20°C存儲(chǔ),并避免反復(fù)凍融,保質(zhì)期一年。
背景資料 Chylomicron remnants and very low density lipoprotein (VLDL) remnants are rapidly removed from the circulation by receptor-mediated endocytosis in the liver. Apolipoprotein E, a main apoprotein of the chylomicron, binds to a specific receptor on liver cells and peripheral cells. ApoE is essential for the normal catabolism of triglyceride-rich lipoprotein constituents. The APOE gene is mapped to chromosome 19 in a cluster with APOC1 and APOC2. Defects in apolipoprotein E result in familial dysbetalipoproteinemia, or type III hyperlipoproteinemia (HLP III), in which increased plasma cholesterol and triglycerides are the consequence of impaired clearance of chylomicron and VLDL remnants. Tissue specificity: Occurs in all lipoprotein fractions in plasma. It constitutes 10-20% of very low density lipoproteins (VLDL) and 1-2% of high density lipoproteins (HDL). APOE is produced in most organs. Significant quantities are produced in liver, brain, spleen, lung, adrenal, ovary, kidney and muscle.
抗體分類:根據(jù)重鏈恒定區(qū)的血清學(xué)類型,可將抗體分為IgM,IgG,IgA,IgD,IgE五類,它們的重鏈分別為mu, gamma, alpha, delta, epsilon鏈。在上述每一類別中,按重鏈構(gòu)造上的變異又可分為幾個(gè)亞類,例如人的IgG可分為IgG1,IgG2,IgG3,IgG4四個(gè)亞類。
輕鏈分為兩種類型,kappa鏈和lambda鏈,但每種抗體中只存在一種類型的輕鏈。
二抗:二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體,上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以應(yīng)用廣泛,如western blot(通過(guò)與特異性抗體結(jié)合來(lái)鑒定蛋白質(zhì)),ELISA(以耦聯(lián)有酶的抗體或抗原為標(biāo)記來(lái)檢測(cè)特異性的蛋白質(zhì),尤其是相應(yīng)的抗原或抗體),免疫組織化學(xué)(檢測(cè)組織中的特異性抗原),免疫細(xì)胞化學(xué)(通過(guò)免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞的抗原組成),流式細(xì)胞術(shù)(通過(guò)檢測(cè)激光所激發(fā)熒光來(lái)鑒定分離不同類型的細(xì)胞)及免疫沉淀(通過(guò)抗原與抗體的特異性結(jié)合作用來(lái)分離相應(yīng)抗原)。二抗針對(duì)某一特定物種(如小鼠)的所有抗體均具有特異性,因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記,大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用;此外,一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子,從而使信號(hào)大大增強(qiáng),提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。
二抗可以耦聯(lián)有幾種不同的標(biāo)記,可以是酶,熒光素,或生物素。
其他抗體保存方法
帶標(biāo)記的抗體
帶標(biāo)記的抗體一般儲(chǔ)存在黑色容器中或者用錫箔紙蓋住。
酶標(biāo)記抗體
堿性磷酸酶和其他酶結(jié)合物對(duì)于冷凍特別敏感,一般應(yīng)在4°C短期存儲(chǔ)。
標(biāo)記抗體長(zhǎng)期保存是在終濃度為50%的甘油或乙二醇中于-20°C保存。雖然某些酶結(jié)合物可在無(wú)保護(hù)劑的情況下于-20°C儲(chǔ)存,但必須分裝,以防止反復(fù)凍融。
熒光標(biāo)記抗體
熒光遇光容易分解,熒光標(biāo)記的試劑(不只是抗體)必須避光保存,其應(yīng)該存放在4°C、避免讓其凝固。
載脂蛋白E抗體參考效價(jià)選擇
Flow Cytometry:1:40-80
Western blotting:1:100-400
Immunocytochemistry in fixed cells:1:50-200
enzyme-linked immuno sorbent assay:1:2000
Immunohistochemistry in paraffin section:1:50-200
如何選擇二抗
通常情況下,某一特定的實(shí)驗(yàn)中可能同時(shí)有幾種二抗可供選擇,如何能選擇到*適合該實(shí)驗(yàn)的二抗,需要綜合以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮:
一抗的物種來(lái)源
一抗是在什么物種來(lái)源的,相應(yīng)的二抗也要是抗該物種的抗體。例如,如果一抗是在小鼠體內(nèi)制備的,那么你就應(yīng)當(dāng)選擇抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔體內(nèi)制備的,那么二抗就應(yīng)當(dāng)是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動(dòng)物中制備的對(duì)二抗的質(zhì)量并無(wú)明顯的影響。
一抗是屬于哪個(gè)類或亞類
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。
單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗體。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。
如果你不知道一抗是哪一類別或亞類,那么抗小鼠IgG是一個(gè)不錯(cuò)的選擇,因?yàn)榇朔N抗體可以識(shí)別大多數(shù)類型的IgG免疫球蛋白。
如何分裝載脂蛋白E抗體
請(qǐng)根據(jù)一次實(shí)驗(yàn)的常用量進(jìn)行分裝。每等份不應(yīng)少于 10 µl;每等份的量越少,抗體儲(chǔ)液濃度受蒸發(fā)和管壁吸附的影響越大。
單克隆抗體
單克隆抗體可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃保存。多年未見(jiàn)有失活、細(xì)菌滋生以及氧化。而凍干法(冷凍干燥,干燥或從冰凍狀態(tài))為一些冰凍以后不穩(wěn)定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數(shù)情況下,凍干的抗體是存放在-20℃。雖然冷凍干燥有許多優(yōu)點(diǎn),它需要昂貴的設(shè)備和勞動(dòng)力。