銜接蛋白α抗體資料參考
產(chǎn)品名稱 銜接蛋白α抗體
產(chǎn)品縮寫 APEX1
蛋 白 名 DNA-(apurinic or apyrimidinic site) lyase
別 稱 APE, APE-1, APEN,APEX, APX, HAP1, REF-1, REF1
免 疫 原 多肽
來(lái) 源 兔
特 異 性 抗人、大鼠、小鼠
克隆類型 多克隆
應(yīng) 用 IH(P)免疫組化(石蠟);IH(F)免疫組化(冰凍);IC細(xì)胞免疫化學(xué);WB免疫印跡
成 分 200μg/ml親和純化抗體,0.01M PBS,30%甘油。
保存條件 連續(xù)使用時(shí)4°C存儲(chǔ),保質(zhì)期六個(gè)月;長(zhǎng)期存儲(chǔ)時(shí)建議分裝為10ul以上小包裝-20°C存儲(chǔ),并避免反復(fù)凍融,保質(zhì)期一年。
背景資料 Apurinic/apyrimidinic (AP) sites occur frequently in DNA molecules by spontaneous hydrolysis, by DNA damaging agents or by DNA glycosylases that remove specific abnormal bases. AP sites are pre-mutagenic lesions that can prevent normal DNA replication so the cell contains systems to identify and repair such sites. Class II AP endonucleases cleave the phosphodiester backbone 5' to the AP site. This gene encodes the major AP endonuclease in human cells. Splice variants have been found for this gene; all encode the same protein
銜接蛋白α抗體分類
抗體分類:根據(jù)重鏈恒定區(qū)的血清學(xué)類型,可將抗體分為IgM,IgG,IgA,IgD,IgE五類,它們的重鏈分別為mu, gamma, alpha, delta, epsilon鏈。在上述每一類別中,按重鏈構(gòu)造上的變異又可分為幾個(gè)亞類,例如人的IgG可分為IgG1,IgG2,IgG3,IgG4四個(gè)亞類。
輕鏈分為兩種類型,kappa鏈和lambda鏈,但每種抗體中只存在一種類型的輕鏈。
二抗:二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體,上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以應(yīng)用廣泛,如western blot(通過(guò)與特異性抗體結(jié)合來(lái)鑒定蛋白質(zhì)),ELISA(以耦聯(lián)有酶的抗體或抗原為標(biāo)記來(lái)檢測(cè)特異性的蛋白質(zhì),尤其是相應(yīng)的抗原或抗體),免疫組織化學(xué)(檢測(cè)組織中的特異性抗原),免疫細(xì)胞化學(xué)(通過(guò)免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞的抗原組成),流式細(xì)胞術(shù)(通過(guò)檢測(cè)激光所激發(fā)熒光來(lái)鑒定分離不同類型的細(xì)胞)及免疫沉淀(通過(guò)抗原與抗體的特異性結(jié)合作用來(lái)分離相應(yīng)抗原)。二抗針對(duì)某一特定物種(如小鼠)的所有抗體均具有特異性,因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記,大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用;此外,一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子,從而使信號(hào)大大增強(qiáng),提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。
二抗可以耦聯(lián)有幾種不同的標(biāo)記,可以是酶,熒光素,或生物素。
其他抗體保存方法
帶標(biāo)記的抗體
帶標(biāo)記的抗體一般儲(chǔ)存在黑色容器中或者用錫箔紙蓋住。
酶標(biāo)記抗體
堿性磷酸酶和其他酶結(jié)合物對(duì)于冷凍特別敏感,一般應(yīng)在4°C短期存儲(chǔ)。
標(biāo)記抗體長(zhǎng)期保存是在終濃度為50%的甘油或乙二醇中于-20°C保存。雖然某些酶結(jié)合物可在無(wú)保護(hù)劑的情況下于-20°C儲(chǔ)存,但必須分裝,以防止反復(fù)凍融。
熒光標(biāo)記抗體
熒光遇光容易分解,熒光標(biāo)記的試劑(不只是抗體)必須避光保存,其應(yīng)該存放在4°C、避免讓其凝固。
銜接蛋白α抗體參考效價(jià)選擇
Flow Cytometry:1:40-80
Western blotting:1:100-400
Immunocytochemistry in fixed cells:1:50-200
enzyme-linked immuno sorbent assay:1:2000
Immunohistochemistry in paraffin section:1:50-200
如何選擇二抗
通常情況下,某一特定的實(shí)驗(yàn)中可能同時(shí)有幾種二抗可供選擇,如何能選擇到*適合該實(shí)驗(yàn)的二抗,需要綜合以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮:
一抗的物種來(lái)源
一抗是在什么物種來(lái)源的,相應(yīng)的二抗也要是抗該物種的抗體。例如,如果一抗是在小鼠體內(nèi)制備的,那么你就應(yīng)當(dāng)選擇抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔體內(nèi)制備的,那么二抗就應(yīng)當(dāng)是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動(dòng)物中制備的對(duì)二抗的質(zhì)量并無(wú)明顯的影響。
一抗是屬于哪個(gè)類或亞類
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。
單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗體。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。
如果你不知道一抗是哪一類別或亞類,那么抗小鼠IgG是一個(gè)不錯(cuò)的選擇,因?yàn)榇朔N抗體可以識(shí)別大多數(shù)類型的IgG免疫球蛋白。
如何分裝銜接蛋白α抗體
請(qǐng)根據(jù)一次實(shí)驗(yàn)的常用量進(jìn)行分裝。每等份不應(yīng)少于 10 µl;每等份的量越少,抗體儲(chǔ)液濃度受蒸發(fā)和管壁吸附的影響越大。
抗體溫度
一般來(lái)說(shuō),抗體存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會(huì)由于微生物的生長(zhǎng)導(dǎo)致抗體退化和/或失活。抗體儲(chǔ)存液放在4℃環(huán)境中1天或者幾周內(nèi)其活性不會(huì)受到明顯影響。另外,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲(chǔ)存于-20℃。通常我們?yōu)榱吮苊夥磸?fù)凍融,可以分裝抗體。還可以加入抗微生物藥物(如疊氮化鈉或硫柳汞)以避免微生物的生長(zhǎng)。