產(chǎn)品展示
可溶性P選擇素,人可溶性P選擇素ELISA試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù)：162發(fā)布時(shí)間：2015/3/18 12:57:37
更新日期：2016/5/25 10:59:01
所 在 地：美洲
產(chǎn)品型號(hào)：
品牌名稱：R&D
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
以雙抗體夾心法為例展示：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原
操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體結(jié)合，形成固相抗體。洗滌除去尚未結(jié)
合的抗體及一些雜質(zhì)。
2）加入待測(cè)標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中，此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來(lái)源為抗血清，包被和酶標(biāo)所使用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克隆抗體，一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng)，作一步檢測(cè)。
在一步法測(cè)定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后帶現(xiàn)象，此時(shí)反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過(guò)剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線（位于抗體過(guò)剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測(cè)讀，所得結(jié)果將低于實(shí)際的含量，這種現(xiàn)象被為鉤狀效應(yīng)（hook effect），因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測(cè)定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）時(shí)，應(yīng)注意可測(cè)范圍的值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。
客戶收集樣品要求
·客戶需提供待檢測(cè)抗體和包被用抗原。
·檢測(cè)的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動(dòng)物的血清、血漿。
·樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存，若長(zhǎng)期保存應(yīng)-70℃。
·樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測(cè)應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測(cè)應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。
·客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運(yùn)輸。郵寄前請(qǐng)與技術(shù)支持溝通確認(rèn)。
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人可溶性P選擇素ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中怎么驗(yàn)證酶標(biāo)板的可靠性
浙一學(xué)院的王同學(xué)來(lái)電咨詢說(shuō)：做了十多次的Elisa，能夠得到線性比較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，但是同樣濃度的標(biāo)準(zhǔn)品每次的OD值都不一致，樣品就更加慘不忍睹了，除了酶標(biāo)板之外，其余封閉蛋白，抗體，抗體稀釋度，等等條件都已經(jīng)更換過(guò)，但是問(wèn)題還是沒(méi)能解決，懷疑是酶標(biāo)板的問(wèn)題。求教各位高手，有什么方法可以快速驗(yàn)證酶標(biāo)板的可靠性。
小編分析：elisa本身靈敏性很高，每次做出來(lái)的值不一樣很正常，特別是od值比較大的時(shí)候更是差別很大，但是只要不要偏差太大就好，一般偏差要求10%內(nèi)吧，好的數(shù)據(jù)是3%內(nèi)。首先要穩(wěn)定所有的條件，不同的條件下做的板子讀值不一樣很正常。在同樣條件下同批次的板子，如果測(cè)定不一樣，就是包被問(wèn)題或者保護(hù)劑的問(wèn)題，但這兩個(gè)都是各個(gè)試劑盒的機(jī)密，看看文獻(xiàn)里別人怎么做的。其次每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)曲上同一濃度樣品的OD值不一樣是很正常的，這與抗原抗體反應(yīng)體系、作用時(shí)間、顯色時(shí)間等等一系列的因素有關(guān)。鑒定該ELISA體系是否可靠，*關(guān)鍵的指標(biāo)是加標(biāo)回收率和稀釋線性，如果你懷疑的話可以做一下。一般來(lái)說(shuō)，國(guó)外知名廠商的ELISA試劑盒是沒(méi)有問(wèn)題的。同時(shí)你還要看一下說(shuō)明書(shū)中ELISA試劑盒的靈敏度，如果你的樣品濃度低于該檢測(cè)下限，則無(wú)法檢測(cè)到，這是很正常的現(xiàn)象，并不是非要每個(gè)樣品都要測(cè)出值才可以。我司主營(yíng)Elisa試劑盒，公司人才濟(jì)濟(jì)。海外留學(xué)博士為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。歡迎來(lái)電咨詢訂購(gòu)我司試劑盒。
