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人酪氨酸酶（TYR）活性elisa檢測(cè)方法說(shuō)明

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上傳時(shí)間：2016/6/23 13:45:26

文件類型：jpg

上 傳 者：勁馬免疫學(xué)第三方檢測(cè)中心

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                         人酪氨酸酶（TYR）活性試劑盒（ELISA）

 

使用說(shuō)明書 貨號(hào): SU-B12124

 

l  本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣 本中人酪氨酸酶（TYR）的活性。

l  有效期：6個(gè)月

 

l  保存條件：2-8℃

 

 

 

 

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人酪氨酸酶（TYR） 抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用 底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。 顏色的深淺和樣品中的人酪氨酸酶（TYR）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD

值），計(jì)算樣品濃度。

 

 

 

樣本處理及要求

1.    血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)， 或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.    血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘， 或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.    細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃ 或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 注：標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。


需要而未提供的試劑和器材

 

1.    酶標(biāo)儀（450nm）

2.    高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.    37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

 

 

試劑盒組成

 

名稱

96 孔配置

48 孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

8 孔×12 條

8 孔×6 條

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6 管

0.3mL*6 管

無(wú)

樣本稀釋液

6mL

3mL

無(wú)

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋

底物 A

6mL

3mL

無(wú)

底物 B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2 張

2 張

無(wú)

說(shuō)明書

1 份

1 份

無(wú)

自封袋

1 個(gè)

1 個(gè)

無(wú)

備注：

1.    標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：160、80、40、20、10、5 U/mL

2. 經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中 直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本 進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

 

注意事項(xiàng)

1.    嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室 溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2.    洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中 不要讓微孔干燥掉。

3.    消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。

4.    底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5.    避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6.    在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7.    平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.    任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞 試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。


9.    不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

 

 

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

 

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

 

 

 

操作步驟

1.    從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2.    設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；

3.    樣本孔中加入待測(cè)樣本 50μL；空白孔不加。

4.    除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體

100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5.    棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙 上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.    每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7.    每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。

 

 

 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪

制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。

 

 

試劑盒性能

 

1.   檢測(cè)范圍：5 U/mL – 160 U/mL。

2.   靈敏度：檢測(cè)濃度小于 1.0 U/mL。

3.   特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.   重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。

相關(guān)產(chǎn)品

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