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聯(lián)系人：錢勇強

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人角質細胞生長因子(KGF)ELISA含量檢測方法

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文件大�。�32kb

上傳時間：2016/4/22 9:43:54

文件類型：jpg

上 傳 者：勁馬免疫學第三方檢測中心

查看次數(shù)：271次

下載次數(shù)：158次

     角質細胞生長因子(keratinocyte gowth factor,KGF)是成纖維細胞生長因子的家族成員，是1989年由Rubin等[[3]從人胚胎肺成纖維細胞的培養(yǎng)液中分離出來的，可與肝素特異性結合，并能調節(jié)上皮細胞的增殖和分化，在多種組織器官尤其是皮膚的生長發(fā)育或修復過程中發(fā)揮著重要功能。研究表明KGF由各種來源的間質細胞產(chǎn)生，通過旁分泌機制分泌，與上皮細胞的受體KGFR特異性結合[’]，對組織和胚胎發(fā)育、上皮創(chuàng)傷修復起到重要作用。本文將對KGF的分子結構及理化特性、基因定位、信號傳導與調控、生物學功能、臨床應用及其發(fā)展一前景做出綜合的論述。

人角質細胞生長因子(KGF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

 

本試劑盒僅供研究使用。

 

檢測范圍：                                                         96T

 

30ng/L -1000 ng/L

 

 

使用目的： 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中角質細胞生長因子(KGF)含量。

實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人角質細胞生長因子(KGF)水平。用純化的人角

質細胞生長因子(KGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入角質 細胞生長因子(KGF)，再與 HRP 標記的角質細胞生長因子(KGF)抗體結合，形成抗體-抗原- 酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色， 并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的角質細胞生長因子(KGF)呈正相 關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人角質細胞 生長因子(KGF)濃度。

試劑盒組成

 

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止液

6ml×1 瓶

2

酶標試劑

6ml×1 瓶

8

標準品（2000ng/L）

0.5ml×1 瓶

3

酶標包被板

12 孔×8 條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說明書

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 張

6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.     標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

 

1000 ng/L

5 號標準品

150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

500 ng/L

4 號標準品

150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

250 ng/L

3 號標準品

150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

125 ng/L

2 號標準品

150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

62.5 ng/L

1 號標準品

150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

 

 

2.     加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、


待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品*終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.     溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.     洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.     溫育：操作同 3。

8.     洗滌：操作同 5。

9.     顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.   測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結：

 

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標


準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，*好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。 保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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