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小鼠白介素6（IL-6）定量分析酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
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上傳時間：2015/12/25 9:53:43
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上 傳 者：勁馬免疫學第三方檢測中心
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小鼠白介素6（IL-6）定量分析酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-6 濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整, 如有疑問請與上海勁馬生物科技有限公司聯(lián)系，我們將提供力所能及的幫助。如您有其它需求，請登錄上海勁馬生物科技有限公司網站或致電本公司。
IL-6簡介：
白介素6（IL-6）是一類多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反應，免疫反應，造血功能，神經系統(tǒng)等方面起到重要的作用。根據來源不同，白介素6分子量從21到28kDa不同，但均為單鏈蛋白。白介素6在多種細胞中都有表達，如T細胞、巨噬細胞、纖維原細胞、肝細胞、血管內皮細胞等。由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被稱為干擾素β2(IFN-β2)、B細胞刺激因子-2(BSF-2)、雜交瘤細胞生長因子、肝細胞刺激因子、毒性T細胞分化因子、巨噬細胞粒細胞誘導因子(MGI-2A)等。白細胞介素6在B-細胞向Ig分泌細胞的轉化過程起到重要的作用，參與了淋巴細胞和單核細胞的分化，誘導神經細胞在B-細胞，T-細胞，肝細胞，造血干細胞以及中樞神經系統(tǒng)的分化作用。此外，肌肉運動收縮作用后白細胞介素6會被釋放到血液中，進而能促進脂肪的分解并改善機體的胰島素耐受性。
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中小鼠IL-6的濃度。小鼠IL-6捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的小鼠IL-6會與捕獲抗體結合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗小鼠IL-6抗體后，抗小鼠IL-6抗體與小鼠IL-6接合，形成夾心的免疫復合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合，親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。*后加入顯色劑，若樣本中存在IL-6將會形成免疫復合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測，讀其450nm處的OD值，小鼠IL-6濃度與OD450值之間呈正比，通過參考品繪制標準曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標本中IL-6濃度。
小鼠定量分析酶聯(lián)免疫檢測試劑盒組成:
組分規(guī)格
預包被板12條或6條
樣本分析緩沖液1瓶5ml/3 ml
標準品稀釋液10ml/5ml
標準品2/1支(凍干)
生物素化抗體1瓶10ml/5ml
HRP連接的酶結合物1瓶10ml/5ml
濃縮洗滌液20× 30ml/瓶
TMB底物1瓶10ml/5 ml
終止液1瓶5ml/3 ml
封板膠紙3/2張
說明書1份
標本收集:
1.標本的收集請按下列流程進行操作：
A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可；
B.血清標本應是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血漿標本，推薦用EDTA的方法收集；
D.若待測樣本不能及時檢測，標本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復凍融。
2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；
3.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除；
4.請勿使用溶血，高血脂或污染的標本檢測，否則結果將不準確。
注：正常小鼠血清或血漿樣本請用標本緩沖液做倍比稀釋后再檢測。
注意事項:
1.試劑盒請保存在2～8℃。
2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶，請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
3.若標準品復溶后，請在三天內用完。
4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。
5.加樣時，請及時更換槍頭，避免交叉污染。
6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。
7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要，在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。
8.室溫反應，請嚴格控制在25～28℃。
9.洗滌過程是至關重要的，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。
11.加樣過程中避免氣泡的產生。
12.血清和血漿標本的檢測時，檢測抗體的孵育時間應適當延長。
檢測前準備工作:
1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫平衡20 分鐘；每次檢測后剩
余試劑請及時于2～8℃保存。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。
3. 標準品:加入去離子水1ml至凍干標準品瓶中使IL-6終濃度達到1000pg/ml，靜置15分鐘后輕輕混懸待徹底溶解，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。（標準曲線取七個點，濃度為1000 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）
洗滌方法:
自動洗板機或人工洗板：每孔洗滌液為300ul，注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。*后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。
實驗過程需自備的材料：
1.不同規(guī)格的加樣槍及相應的槍頭； 2.酶標儀； 3．自動洗板機； 4．去離子水或雙蒸水；
操作步驟:
1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數，取出所需板條放置在框架內，暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封，保存于4℃。
2.建議設置本底較正孔，即空白孔,設置方法為該孔只加TMB 顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。
3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中，用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育120分鐘。對于血清或血漿標本，請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本，如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
4.洗板5次，且*后一次置厚吸水紙上拍干。
5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育60分鐘。
6.洗板5次，且*后一次置厚吸水紙上拍干。
7.加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，避光室溫孵育20分鐘。
8.洗板5次，且*后一次置厚吸水紙上拍干。
9.加入顯色劑TMB100ul/孔，避光室溫孵育20分鐘。
10.加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。
結果判斷:
1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效，復孔的值平均后可作為測量值。
2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。
3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
4.若標本OD 值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。
典型數值和參考曲線
濃度pg/ml 典型OD值1 典型OD值2 OD平均值
0 0.1123 0.1279 0.1201
31.25 0.3321 0.3764 0.35425
62.5 0.4143 0.4545 0.4344
125 0.5423 0.5761 0.5592
250 0.9524 0.9803 0.96635
500 1.4201 1.5021 1.4611
1000 2.1121 2.2231 2.1676
注意：本圖僅供參考，應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。
靈敏度，特異性和重復性:
1.靈敏度：多次重復結果表明，*小檢出量為2.8pg/ml。
2.特異性：與大鼠IL-6,人IL-6沒有交叉反應。
3.重復性：板內，板間變異系數均<10%.
本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-6 濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整, 如有疑問請與上海勁馬生物科技有限公司聯(lián)系，我們將提供力所能及的幫助。如您有其它需求，請登錄上海勁馬生物科技有限公司網站或致電本公司。
IL-6簡介：
白介素6（IL-6）是一類多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反應，免疫反應，造血功能，神經系統(tǒng)等方面起到重要的作用。根據來源不同，白介素6分子量從21到28kDa不同，但均為單鏈蛋白。白介素6在多種細胞中都有表達，如T細胞、巨噬細胞、纖維原細胞、肝細胞、血管內皮細胞等。由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被稱為干擾素β2(IFN-β2)、B細胞刺激因子-2(BSF-2)、雜交瘤細胞生長因子、肝細胞刺激因子、毒性T細胞分化因子、巨噬細胞粒細胞誘導因子(MGI-2A)等。白細胞介素6在B-細胞向Ig分泌細胞的轉化過程起到重要的作用，參與了淋巴細胞和單核細胞的分化，誘導神經細胞在B-細胞，T-細胞，肝細胞，造血干細胞以及中樞神經系統(tǒng)的分化作用。此外，肌肉運動收縮作用后白細胞介素6會被釋放到血液中，進而能促進脂肪的分解并改善機體的胰島素耐受性。
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中小鼠IL-6的濃度。小鼠IL-6捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的小鼠IL-6會與捕獲抗體結合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗小鼠IL-6抗體后，抗小鼠IL-6抗體與小鼠IL-6接合，形成夾心的免疫復合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合，親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。*后加入顯色劑，若樣本中存在IL-6將會形成免疫復合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測，讀其450nm處的OD值，小鼠IL-6濃度與OD450值之間呈正比，通過參考品繪制標準曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標本中IL-6濃度。
小鼠定量分析酶聯(lián)免疫檢測試劑盒組成:
組分規(guī)格
預包被板12條或6條
樣本分析緩沖液1瓶5ml/3 ml
標準品稀釋液10ml/5ml
標準品2/1支(凍干)
生物素化抗體1瓶10ml/5ml
HRP連接的酶結合物1瓶10ml/5ml
濃縮洗滌液20× 30ml/瓶
TMB底物1瓶10ml/5 ml
終止液1瓶5ml/3 ml
封板膠紙3/2張
說明書1份
標本收集:
1.標本的收集請按下列流程進行操作：
A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可；
B.血清標本應是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血漿標本，推薦用EDTA的方法收集；
D.若待測樣本不能及時檢測，標本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復凍融。
2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；
3.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除；
4.請勿使用溶血，高血脂或污染的標本檢測，否則結果將不準確。
注：正常小鼠血清或血漿樣本請用標本緩沖液做倍比稀釋后再檢測。
注意事項:
1.試劑盒請保存在2～8℃。
2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶，請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
3.若標準品復溶后，請在三天內用完。
4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。
5.加樣時，請及時更換槍頭，避免交叉污染。
6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。
7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要，在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。
8.室溫反應，請嚴格控制在25～28℃。
9.洗滌過程是至關重要的，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。
11.加樣過程中避免氣泡的產生。
12.血清和血漿標本的檢測時，檢測抗體的孵育時間應適當延長。
檢測前準備工作:
1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫平衡20 分鐘；每次檢測后剩
余試劑請及時于2～8℃保存。
2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。
3. 標準品:加入去離子水1ml至凍干標準品瓶中使IL-6終濃度達到1000pg/ml，靜置15分鐘后輕輕混懸待徹底溶解，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。（標準曲線取七個點，濃度為1000 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）
洗滌方法:
自動洗板機或人工洗板：每孔洗滌液為300ul，注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。*后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。
實驗過程需自備的材料：
1.不同規(guī)格的加樣槍及相應的槍頭； 2.酶標儀； 3．自動洗板機； 4．去離子水或雙蒸水；
操作步驟:
1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數，取出所需板條放置在框架內，暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封，保存于4℃。
2.建議設置本底較正孔，即空白孔,設置方法為該孔只加TMB 顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。
3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中，用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育120分鐘。對于血清或血漿標本，請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本，如稀釋量大，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
4.洗板5次，且*后一次置厚吸水紙上拍干。
5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，室溫孵育60分鐘。
6.洗板5次，且*后一次置厚吸水紙上拍干。
7.加入酶結合物工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，避光室溫孵育20分鐘。
8.洗板5次，且*后一次置厚吸水紙上拍干。
9.加入顯色劑TMB100ul/孔，避光室溫孵育20分鐘。
10.加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。
結果判斷:
1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效，復孔的值平均后可作為測量值。
2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。
3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
4.若標本OD 值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。
典型數值和參考曲線
濃度pg/ml 典型OD值1 典型OD值2 OD平均值
0 0.1123 0.1279 0.1201
31.25 0.3321 0.3764 0.35425
62.5 0.4143 0.4545 0.4344
125 0.5423 0.5761 0.5592
250 0.9524 0.9803 0.96635
500 1.4201 1.5021 1.4611
1000 2.1121 2.2231 2.1676
注意：本圖僅供參考，應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。
靈敏度，特異性和重復性:
1.靈敏度：多次重復結果表明，*小檢出量為2.8pg/ml。
2.特異性：與大鼠IL-6,人IL-6沒有交叉反應。
3.重復性：板內，板間變異系數均<10%.
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