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葉酸ELISA試劑盒操作說明書

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上傳時間：2015/7/2 16:53:11

文件類型：jpg

上 傳 者：勁馬免疫學第三方檢測中心

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下載次數(shù)：116次

 葉酸（FA）酶聯(lián)免疫分析

 

 

試劑盒使用說明書

 

 

本試劑盒僅供研究使用。

 

 

檢測范圍：                                                                                                                     96T

0.7μg/L -20μg/L

 

 

使用目的： 本試劑盒用于測定食品(牛奶等)相關(guān)樣本中葉酸（FA）含量。

實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中葉酸（FA）水平。用純化的葉酸（FA）抗體包

被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入葉酸（FA），再與 HRP 標記的葉 酸（FA）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣 品中的葉酸（FA）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲 線計算樣品中葉酸（FA）濃度。

試劑盒組成

 

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止液

6ml×1 瓶

2

酶標試劑

6ml×1 瓶

8

標準品（40μg/L）

0.5ml×1 瓶

3

酶標包被板

12 孔×8 條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說明書

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 張

6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟

1.    標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

 

20μg/L

5 號標準品

150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

10μg/L

4 號標準品

150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

5μg/L

3 號標準品

150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.5μg/L

2 號標準品

150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

1.25μg/L

1 號標準品

150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

 

 

2.    加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，


然后再加待測樣品 10µl（樣品*終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.    溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.    配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.    溫育：操作同 3。

8.    洗滌：操作同 5。

9.    顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

 

 

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD  值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，


即為樣品的實際濃度。 注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，*好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。 保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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